细胞培养的各种器皿的物理消毒灭菌法

转化细胞通过高潮、射线、微波以及器械进行灭菌或除菌的方法均为物理灭菌方法。

(1)紫外线消毒 用于消毒空气、操作台面和一些不能用干热、湿热灭菌的培养器皿，如塑料培养皿、培养板等。这是常使用的消毒方法之一。

(2)干热灭菌 主要用于玻璃器皿的灭菌。将用于细胞培养的器皿放人干燥箱内，加热至160℃，保温90-120 min。用于RNA提取实验的用品则需180℃，保温5-8 h。

(3)湿热灭菌 此方法也称为高压蒸汽灭菌，是zui有效的一种灭菌方法。主要应用范围是布类、橡胶制品(如胶塞)、金属器械、玻璃器皿、某些塑料制品以及加热后不发生沉淀的无机溶液(如Hanks液、PBS、20×SSC等)。手动高压灭菌锅操作如下：

①首先查看高压锅内的水是否充足，放人物品盖好盖。

②加热高压锅。将放气阀打开，放气5—10 min，以排除锅内的冷空气。

③待锅内水沸腾后，落下放气阀继续升温升压，玻璃器皿等用15磅(121℃)30 min，胶塞、塑料制品、溶液等可用10磅(115 ℃)20 min。调节火力大小保持该压力。

④停止加热，待压力自然下降至0再打开放气阀排汽，开盖，取出高压灭菌的物品烘干。

电热自动灭菌锅使用说明(型号：SANYO Autoclave MLS-3020)：

①放气筒加水至LOW水平线处，转化细胞将与高压锅相连的导气管插入放气筒里，然后将放气筒归于原位。

②打开高压锅盖，加入蒸馏水至高压锅底的水位线，水位线位于V型凹槽的1/3-2/3处。

③打开电源。

④设定高压温度及时间，高压锅的温度范围为105-121℃，高压灭菌一般采用121℃20—30 min。

⑤把待高压的物品置于高压锅内，顺时针方向将exhaust钮旋至close位置。

⑥关闭高压锅盖，旋至显示屏上左上角的红亮点刚出现为止。

⑦按start钮，开始高压，在温度达80℃时显示器开始显示温度，当温度达到所需的设定温度时，在显示屏的左下角有一长形的指示灯闪亮，直到高压时间结束后指示灯灭，此时蜂鸣器报警一声。当压力降至0 MPa时，蜂鸣器再报警一声。温度降至80℃时，蜂鸣器报警10次。显示屏温度指示消失，此时才可打开锅盖。

⑧关电源，开高压锅盖，取出已灭菌的物品，烘干。

(4)滤过除菌 用于培养用液和各种不能高压灭菌的溶液的灭菌。采用金属滤器和小型的塑料滤器，配上可以更换的微孔滤膜，极大地方便了操作。滤器型号按直径大小划分。如过滤量大的培养用液常用较大型号的金属滤器(直径90 mm、100 mm、142 mm……等)，配以过滤泵使用。过滤量较小的液体常用注射器推动的塑料小滤器(直径20 mm、25 mm等)。滤膜孔径有0.60 μm、0.45 μm、0.35 μm、0.22 μm、0.10μm等，以0.22 μm除菌zui为保险，但对于较粘稠难滤过的液体，仍需选用孔径较大的滤膜。

①在过滤器上装上微孔滤膜，孔径为0.22μm。

②转化细胞用布包好，湿热灭菌后使用。