分析细胞常见的消化液

ATCC细胞取材进行原代培养时常常需要将组织块消化解离形成细胞悬液，传代培养时也需要将贴壁细胞从瓶壁上消化下来，常用的消化液有胰酶(Trypsin)溶液和edta溶液，有时也用胶原酶(collagenase)溶液。
 
1.胰酶溶液：胰酶活性可用消化酪蛋白的能力表示，常见有1：125和1：250，即一份胰酶可消化125或250份酪蛋白。组织培养用胰酶溶液一般配制成0.1-0.25%浓度，配制时要用不含Ca2+、Mg2+及血清的平衡盐溶液(如前面的D-Hank"s)，因为这些物质会对胰酶产生抑制作用。胰酶作用及溶解的*pH是8-9，配制胰酶溶液应将液体调至pH8左右，充分溶解，过滤除菌。过滤后可以再调只pH7.5，也可不调。
 
使用细胞清洗液配制胰酶消化液：含0.5%胰酶的ATCC细胞清洗液(100ml细胞清洗液加0.5g胰酶)，过滤除菌，分装于4度保存。
 
2.EDTA溶液：EDTA溶液也常用来解离细胞，它的作用机制是破坏细胞间的连接。对于一些贴壁特别牢固的细胞，还可以用EDTA和胰酶的混合液进行消化。EDTA溶液的使用浓度为0.02%，配制时应加碱助溶，配制后可过滤除菌，也可高温消毒灭菌。
 
3.胶原酶溶液：胶原酶在上皮类细胞原代培养时经常使用，胶原酶作用的对象是胶原组织，因此不容易对ATCC细胞产生损伤。胶原酶的使用浓度为0.1-0.3mg/L或200000U/L,作用的*pH为6.5。胶原酶不受Ca2+、Mg2+及血清的抑制，配制时可用PBS。