ATCC细胞核移植技术

ATCC细胞从2-4月龄成熟母鼠获得，未成熟支持细胞从0-5日龄未成熟雄鼠获得。卵丘细胞通过透明质酸酶脱颗粒细胞获得。未成熟睾支持细胞获得方法如下：
取下的小鼠睾用0.1mg/ml胶原酶与0.01mg/ml脱氧核糖核酸酶37℃处理30min，然后用0.2mg/ml胰蛋白酶37℃处理5min，去睾悬液即可。睾悬液用含4mg/ml BSA的PBS洗一下就可用于显微注射了。未成熟睾细胞根据其体积与形态即可确认。
MII期受体卵母ATCC细胞在37℃条件下去核，操作液为含5µg/ml CB的Hepes-KSOM。BDF1染色体在Nomarski光学镜下能够很容易的辨认，利用Piezo装置将纺锤体及其周围少量胞质取出。去核的卵母细胞在KSOM液中孵育30min-2h使其胞膜*恢复。供体细胞在室温下、Hepes-KSOM液中利用Piezo装置注入去核卵母细胞中。供体细胞的核没有必要从细胞质中*弄出来，因为卵丘细胞与未成熟睾支持细胞的胞膜都是软的，在注射时它们的胞膜很容易破。注射了体细胞的卵母细胞在KSOM中孵育1-2h使体细胞的染色质凝集。重构胚在无Ca2、含3mM SrCl2 与5µg/ml CB的KSOM液中孵育1h，然后在含5µg/ml CB的KSOM液中孵育5h，zui后移入单纯的KSOM液中培养72h。
72h后发育到桑囊胚阶段的重构胚移植入8-12周龄假孕3d的ICR雌鼠(小鼠见栓当天称为*)子宫中。8-10枚胚胎移入一侧子宫(16-20枚胚胎移入一种受体小鼠)。ATCC细胞在第20d时，检测受体小鼠中成活的胚胎，活着的小鼠让泌乳ICR雌鼠哺乳。
含量测定    氟比洛芬酯    对照品    100696-200401        200mg
HPLC法含量测定    盐酸舍曲林    对照品    100702-200401        50mg
HPLC法含量测定    马来酸依那普利    对照品    100705-200401        100mg
HPLC检查    依那普利双酮    对照品    100706-200401        30mg
HPLC系统适应性检查    依那普利拉    对照品    100707-200401        30mg
含量测定（HPLC）    兰索拉唑    对照品    100709-200501        100mg
ATCC细胞