大鼠elisa检测试剂盒制取质粒的过程

      大鼠elisa检测试剂盒我们知道，质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的主要载体，它在基因操作中具有重要作用。分离与提取是zui常用、zui基本的实验技术。

     它的制取方法有很多的，一般情况下来，大多都是包括了细菌的培养、细菌的收集和裂解、质粒DNA的分离和纯化这三个步骤。而今天给朋友们讲说的实验中，是以以碱裂解法为例，其中，我们要掌握碱裂解法抽提质粒的原理、步骤及各试剂的作用。 

    所需物品：
1、含有质粒pUC18载体的大肠杆菌菌液
2、克隆有水稻外源片段的BAC的大肠杆菌菌液 
    取过程
1、取含有pUC18质粒的大肠杆菌菌液于LA培养基上37℃过一个晚上培养； 
2、用无菌牙签挑取单菌落，接种于含有Amp抗生素的LB培养基中，37℃摇床~250 r/min过一个晚上培养； 
3、吸取1.5 ml菌液，12000 g离心2分钟，收集菌体，倒掉菌液；吸取1.5 ml菌液，再次收集菌体，尽量将菌液倒干净； 
4、加入300 ml溶液 I振荡打匀,重新悬浮细胞，震荡混匀（这里的时候，上海恒远提醒注意：应*打匀沉淀或碎块）；
5、加入300 ml溶液II，轻柔颠倒混匀，放置至清亮，一般不超过5分钟； 
6、加入300 ml溶液III颠倒混匀，放置于冰上10分钟，使杂质充分沉淀； 
7、12000 g离心10分钟； 
8、吸取800 ml上清液（注意！不要吸取到飘浮的杂质）至另一Eppendorf管中，加入2/3体积的异丙醇，室温下放置5分钟； 
9、12000 g 常温离心15分钟； 
10、倒尽上清，加75％乙醇浸洗除盐（放置片刻或离心3分钟后倒去上清）； 
11、室温放置或超净台上风干DNA； 
12、加40 ml灭菌超纯水或TE溶解； 
13、质粒、BAC的质量检测，于-20℃保存. 

      我们这个实验的主要原理依据是在pH 12.0 ~ 12.6碱性环境中，细菌的线性大分子量染色体DNA变性分开，而共价闭环的质粒DNA虽然变性但仍处于拓扑缠绕状态。将pH调至中性并有高盐存在及低温的条件下，大部分染色体DNA、大分子量的RNA和蛋白质在去污剂SDS的作用下形成沉淀，而质粒DNA仍然为可溶状态.通过离心，可除去大部分细胞碎片、染色体DNA、RNA及蛋白质，质粒DNA尚在上清中，然后用酚抽提进一步纯化质粒DNA。