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ELISA测定试剂盒:抗体检测基本原理:
1、加入底物,酶作用底物,使之变色。底物被酶催化变为有色产物。
2、产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅有无定性或定量分析。
3、将特定抗体(一抗)结合到某种固相载体表面,并保持其免疫性。一抗是待测抗体的抗体,识别待测抗体。
4、测定时,固定的一抗先与样品稀释液反应,将样品中待测抗体固定;洗涤后再与二抗反应。每一步之间都要进行洗涤。
5、二抗是一种与酶偶联的抗体,既保留了其免疫活性,又保留了酶的活性。二抗识别并结合待测抗体。
ELISA测定试剂盒操作事项:
1、使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
2、当混合蛋白溶液时应尽量轻缓,避免起泡。
3、洗涤过程非常重要,不充分的洗涤易造成假阳性。
4、在配制标准品、检测溶液工作液时,请以相应的稀释液配制,ELISA试剂盒不能混淆。
5、底物请避光保存。
6、控制好每一步的操作时间。
7、一次加样时间较好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
8、请每次测定的同时做标准曲线,较好做复孔。
9、如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定。