人D-乳酸ELISA检测试剂盒操作步骤

人D-乳酸ELISA检测试剂盒操作步骤:

1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在di一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟。

恒河猴肾细胞；RM-1

EB病毒转化的绒猴淋巴细胞；B95-8

恒河猴肾细胞；MMK2

恒河猴肾细胞；MMK3

恒河猴肺细胞；RM-L1

SV40转化的非洲绿猴肾细胞；COS-1

恒河猴肾细胞；RM-2

恒河猴肾细胞；RM-3

恒河猴皮肤细胞；RM-S1

猕猴肌肉细胞；MMm7

猕猴皮肤细胞；MMS4

猕猴皮肤细胞；MMS7

猕猴肺细胞；MML2

鱼源细胞

斑马鱼尾鳍细胞；AB.9

草鱼肾细胞；GIK

草鱼肝脏细胞；L8824

草鱼肾细胞；GIK

团头鲂尾鳍细胞；WCF

白鲢尾鳍细胞系；SCF

散鳞镜鲤尾鳍细胞；YZ21

鲤鱼尾鳍细胞；YZ16

高背鲫鱼尾鳍细胞；GBJd

兴国鲤尾鳍细胞；XGL

蚊源细胞

蚊子幼虫体细胞；Aedes albopictus clone C6/36

幼蚊细胞；C6/36