ATP依赖性DNA连接酶Ⅰ(LIG1)重组蛋白人操作步骤

ATP依赖性DNA连接酶Ⅰ(LIG1)重组蛋白人操作步骤：

Ⅰ 实体组织蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制剂， 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF，混匀。冰上保存数分钟待用。

2．  每100mg固体组织置于培养皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小块，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃匀浆器上下手动匀浆15次，注意低温操作；

3． 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管，离心10000转/分，4℃离心5 min；

4． 取上清转移至新的预冷的离心管中，即为全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分装保存于-70℃,避免反复冻融。

Ⅱ 培养细胞蛋白提取

1． 贴壁培养的细胞，吸去培养基后，加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次，每次振摇数次以尽量去除培养液；

2． 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞，将细胞及培养液移至离心管中， 1000转/分离心10 min，再用10mL/150mm培养板的冷PBS，1000转/分离心5 min洗两次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制剂， 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF，混匀。冰上保存数分钟待用。

4． 细胞洗涤后，转至新的预冷的离心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

小鼠胱天蛋白酶5(CASP-5)ELISA KitMouse Caspase-5,CASP5 ELISA kit

小鼠胱天蛋白酶3(Casp-3)ELISA KitMouse Caspase 3,Casp-3 ELISA Kit

小鼠胱天蛋白酶10(CASP-10)ELISA KitMouse Caspase-10,CASP10 ELISA kit

小鼠骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA KitMouse Bone morphogenetic protein 6,BMP-6 ELISA Kit

小鼠骨形成蛋白(BMPs)ELISA KitMouse bone morphogenetic proteins,BMPs ELISA Kit

小鼠骨涎蛋白(BSP)ELISA KitMouse Bone sialoprotein,BSP ELISA kit

小鼠骨特性碱性磷酸酶C端肽ELISA KitMouse C-terminal peptide of bone-specific alkaline phosphatase ELISA kit

小鼠骨特性碱性磷酸酶(BALP)ELISA KitMouse Bone-specific alkaline phosphatase,BALP ELISA kit

小鼠骨成型蛋白9(BMP-9)ELISA KitMouse bone morphogenetic protein 9,BMP-9 ELISA Kit

小鼠骨成型蛋白15(BMP-15)ELISA KitMouse Bone Morphogenetic Protein 15,BMP-15 Elisa kit

小鼠谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)ELISA KitMouse glutathione peroxidase,GSH-Px ELISA Kit

小鼠谷氨酸脱羧酶自身抗体IgM(GAD-Ab-IgM)ELISA KitMouse glutamic acid decarboxylase autoantibody IgM,GAD-Ab-IgM ELISA Kit

小鼠谷氨酸脱羧酶自身抗体IgG(GAD-Ab-IgG)ELISA KitMouse glutamic acid decarboxylase autoantibody IgG,GAD-Ab-IgG ELISA Kit

小鼠谷氨酸脱氢酶(GDH/GLDH)ELISA KitMouse Glutamate dehydrogenase,GDH/GLDH ELISA Kit

小鼠孤腓肽(OFQ/N)ELISA KitMouse orphanin FQ/nociceptin,OFQ/N ELISA Kit

小鼠钩端螺旋体IgG(Lep IgG)ELISA KitMouse Leptospira antibody(IgG)ELISA Kit

小鼠高铁血红蛋白(MHB)ELISA KitMouse Methemoglobin,MHB ELISA Kit

小鼠高尔基蛋白73(GP-73)ELISA KitMouse golgi protein 73,GP-73 ELISA Kit

小鼠高半胱氨酸(Hcy)ELISA KitMouse Homocysteine,HCY ELISA Kit

小鼠肝脂酶(HL)ELISA KitMouse hepatic lipase,HL ELISA Kit