转化细胞经典转染技术

转化细胞转染技术的广泛使用促进了人们对外源基因在哺乳动物细胞中的表达等方面的认识，并在方法学上促进了该领域及相关领域的发展。从磷酸钙到脂质体，到多胺，可用于转染的细胞种类已越来越多，转染试剂也不断更新换代，而转染也不再于将DNA转入细胞中了，RNA，siRNA，蛋白质等等生物大分子也进入了转染的行列。
DEAE-葡聚糖（Diethylaminoethyl (DEAE)-dextran）：这个早在1965年出现的转染方法差不多是zui古董级的方法之一了，直到现在竟然还有少数人坚持采用。带正电的DEAE-葡聚糖或polybrene多聚体可以结合带负电的DNA分子，使得DNA复合物结合在带负电的细胞表面。通过使用DMSO或甘油获得的渗透休克，也可能是细胞内吞作用，使得DNA复合体进入细胞。DEAE-葡聚糖于瞬时转染，可重复性好，转染时要除掉血清。 
磷酸钙共沉淀转染：zui早是在1973年开始采用的。氯化钙＋DNA＋磷酸缓冲液按一定的比例混合，形成的极微小的磷酸钙-DNA复合物沉淀粘附到细胞膜表面，借助内吞作用进入细胞质。沉淀颗粒的大小和质量对于转染的成功至关重要，pH值，钙离子浓度，DNA浓度，沉淀反应时间，细胞孵育时间乃至各组分加入顺序和混合的方式都可能对结果产生影响，重复性不佳。现在还会操作这种古董级方法的人怕已经不多啦。比起DEAE法这个更容易得到稳定转染，但是转原代细胞比较困难的。
电穿孔法：通过短暂的高场强电脉冲处理细胞，沿细胞膜的电压差异会导致细胞膜暂时穿孔。DNA被认为是穿过孔扩散到细胞内。电脉冲和场强的优化对于成功的转染非常重要，因为过高的场强和过长的电脉冲时间会不可逆地伤害细胞膜而裂解细胞。理论上说转化细胞电穿孔法可用于各种细胞，而且不需要另外采购特殊试剂。可是需要昂贵的设备——这个一次性投资可不便宜，而且每次转染需要更多的细胞和DNA——因为细胞死亡率高。每种细胞电转的条件都需要进行多次优化。
125mg        298-59-9     盐酸哌甲酯标准品
125mg        3105-68-8     盐酸氟奋乃静庚酸酯标准品
150mg    Zileuton    111406-87-2     齐留通标准品
150mg    Verapamil Related Compound F    1993/3/8    维拉帕米相关物质F标准品
150mg    Urea C 13     58069-82-2     尿酸C13标准品
150mg    Topiramate     97240-79-4     托吡酯标准品
150mg    misartan     144701-48-4     替米沙坦标准品
150mg    Tacrolimus     109581-93-3     他克莫司标准品
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