肿瘤细胞消化法原代培养

Wistar大鼠处死，肿瘤细胞迅速取出胸主动脉，浸泡在含无菌PBS的表面皿中，转移到无菌超净台。在表面皿中漂洗主动脉去除残留的血迹，纵向剪开主动脉，把主动脉铺平并使内膜朝上，用镊子来回刮除内膜层，剥离血管中膜。将剥离的血管中膜用眼科剪剪碎，碎片大小在1 mm×1 mm左右。装入含0.25%胰酶的玻璃培养瓶中于37℃条件下消化。当在显微镜下观察组织块表面出现大量细胞时应立即加入血清终止消化，一般消化的时间在 3.5 h。终止消化后将玻璃培养瓶置于37℃空气摇床振摇10 min，继续用吹打的方法使组织块表面的细胞尽可能脱落。待细胞从组织块脱离后，120目细胞筛过滤，转入离心管内离心，弃上清，用含20%小牛血清的 DMEM培养基吹打细胞，zui后接种于25 mL培养瓶，放入CO2孵箱培养，48 h后换液。
细胞融合后，倒去旧的培养液，加入适量的0.25%胰酶，显微镜下观察，见细胞收缩后去除消化液，加入适量培养液，吹打细胞，以1∶2接种于新培养瓶中，补足培养液，放入37℃、5%CO2孵箱培养。传代细胞从第三代开始可换用含10%小牛血清的DMEM培养基培养。VSMC 至少可以传16代以上，并且从第二代开始平滑肌细胞即可冻存。
相差显微镜下，肿瘤细胞未汇合之前多数呈梭形，至汇合后，部分区域细胞束状排列，呈典型的“峰和谷”状态。将传代获得的平滑肌细胞接种于盖玻片上，3~4天后至亚汇合状态，取出细胞爬片，PBS清洗后用4℃纯丙酮固定15~30 min，自然晾干。采用小鼠抗大鼠α-肌动蛋白抗体免疫组织化学染色鉴定VSMC肌动蛋白。根据S-P免疫组织化学染色的常规方法，以平滑肌细胞胞浆棕黄色为阳性结果。
400mg    Mitoxantrone Hydrochloride     70476-82-3     盐酸米托蒽醌标准品
400mg    Meloxicam     71125-38-7     美洛昔康标准品
400mg    Mafenide Acetate    13009-99-9     醋酸磺胺米隆标准品
400mg    Levocarnitine     541-15-1     左卡尼汀标准品
400mg    Ioxilan    107793-72-6     碘昔兰标准品
400mg    Iopromide     73334-07-3     碘普罗胺标准品
400mg    Etodolac    41340-25-4    依托度酸标准品
400mg    Cloprostenol Sodium    55028-72-3    氯前列烯醇钠标准品
400mg    Climbazole    38083-17-9    苯咪丁酮标准品
400mg    Ciprofloxacin Hydrochloride    86393-32-0    盐酸环丙沙星标准品
肿瘤细胞