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培养液可轻微浑浊,在显微镜下细小的点状物数量非常多,轻微活动,ATCC细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢,而且细胞状态不好,边缘不清楚,细胞不透亮。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的,但他们的数量小,细胞占优势所以不会影响到细胞的正常生长,只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长,zui终形成恶性循环。
ATCC细胞污染的可能原因:配液消毒问题、操作问题、环境问题等等。
关于培养基的无菌状况,取培养基至培养瓶中(不加细胞),37 度试培养一段时间后观察。如果没有细菌生长 就是操作的问题。也可以在培养基中事先加入双抗(硫酸链霉素和氨苄青霉素)。但双抗有时会影响细胞的状态,所以在做转染、检测细胞某项指标前一定要撤去双抗,以避免影响实验结果。
ATCC细胞实验前,超净台/实验间紫外照射30min,细胞培养室有24h的空气消毒装置更好了。操作前70%酒精擦超净台消毒,酒精擦手,擦培养瓶,擦培养基瓶以及各种瓶子的口,总之,所有进超净台的物品都用酒精擦拭一遍。拿培养瓶和培养液时候尽量托下面拿,切忌不要拿瓶颈部位。有一点要注意的是,超净台里面的东西一定要尽量少放,东西太多活影响超净台内空气流通及空气除菌。实验过程中尽量避免打闹说笑。