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双位点HC-kit受体细胞株；DMF7图片【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。
细胞名称 双位点HC-kit受体细胞株；DMF7图片
形态特性  圆形
生长特性 悬浮生长
特征特性  该细胞株由陈松森教授实验室建立；双位点Cys151和Cys183突变的c-Kit基因转染293ET细胞，筛选获得。 
培养条件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS；IL-3 or rhGM-CSF
传代方法  1:3传代；3~4天1次。
传代情况 不详
冻存条件  基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法（-）
STR  
同工酶 
染色体  
使用权限 A类
细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:    
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。   细胞到达客户手中，1个月内出现任何问题，导致细胞在冻存前死亡，我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤：
1）贴壁细胞传代：提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内，吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞，加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用，用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
2）悬浮细胞传代：将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min，弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。

Rosetta(DE3) 菌种    1mL
Rosetta(DE3)pLysS 感受态细胞    0.1mL×10
Rosetta(DE3)plysS 菌种    1mL
RosettaBlue(DE3) 菌种    1mL
Rosetta-gami B(DE3) 菌种    1mL
Rosetta-gami B(DE3)plysS 菌种    1mL
Rosetta-gami(DE3) 感受态细胞    0.1mL×10
Rosetta-gami(DE3) 菌种    1mL
Rosetta-gami(DE3)pLysS 感受态细胞    0.1mL×10
Rosetta-gami(DE3)plysS 菌种    1mL
ROX 参考染料    200μLC-8 Ceramine (50 mg)C-8 Ceramine, N-octylsphingosine
MAM2201 (5 mg)AM221 4-methylnaphthyl analog|JWH 122 N-(5-fluoropentyl) analog, MAM2201, [1-(5-fluoropentyl)-1H-indol-3-yl](4-methyl-1-naphthalenyl)-methanone
海藻酸（25GM）Alginic Acid， CAS 9005-38-3
三水FeNaEDTA（500GM）FeNaEDTA， 3H2O， CAS# 15708-41-5； MW 421.2
一水氯化锰（100GM）Manganese Sulfate， H2O， CAS# 10034-96-5； ≥98%
氢氧（1KG）Sodium Hydroxide， CAS# 1310-73-2； MW 41
L-缬氨酸（25GM）L-Valine， CAS# 72-18-4； MW 117.15； USP
AFC[7-氨基-4-三氟甲基香豆素] 可标记多肽AFC [7-Amino-4-trifluoromethylcoumarin] Validated for labeling peptides
6-TAMRA， SE [6-羧基四甲基罗丹明，琥珀酰亚胺酯] 可标记寡核苷酸6-TAMRA， SE [6-Carboxytetramethylrhodamine， succinimidyl ester] Validated for labeling oligos
TQ3 氨基磷酸酯Tide Quencher 3 phosphoramidite [TQ3 phosphoramidite]
5-TAMRA标记的Asp天冬氨酸FMOC-Asp（5-TAMRA）-OH
20S蛋白酶体荧光底物（Suc-LLVY）2R110（Suc-LLVY）2R110
Pluronic F-127 10%溶液于水中Pluronic F-127 10% solution in water
pH荧光探针BCBCF， AM 超级纯BCBCF， AM UltraPure grade
5（6）-FAM氨基磷酸酯5（6）-FAM Phosphoramidite
ROX 参考染料 II    100μL
RsaI    200U
热敏磷酸酶    500U
热启动 Taq DNA 聚合酶    100U
热启动 Tth DNA 聚合酶    250U
人 NK 细胞分离液 1.062    200mL
人白细胞分离液 1.078    200mL
人玻连蛋白    100μg