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更新时间:2017-01-05
厂商性质:经销商
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人胚肾细胞-F克隆;293F图片【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗。
细胞名称 人胚肾细胞-F克隆;293F图片
形态特性 上皮样
生长特性 贴壁生长;悬浮生长
特征特性
培养条件 悬浮培养用特制无血清培养基;贴壁培养用MEM-EBSS + NEAA + 10%FBS
传代方法
传代情况
冻存条件 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:7,12;D13S317:12,14;D16S539:,9,13;D18S51:17,18;D6S1043:11;D21S11:28,30.2;D2S1338:19;D3S1358:15,17;D5S818:8,9;D7S820:11;D8S1179:12,14;FGA:23;Penta E:15;vWA:16,19;
同工酶
染色体
使用权限 B类
细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L),90%;优质胎牛血清,10%。
2、培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二、细胞处理:
1、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养)。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1)弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。 细胞到达客户手中,1个月内出现任何问题,导致细胞在冻存前死亡,我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤:
1)贴壁细胞传代:提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内,吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量PBS润洗细胞,加入适量胰酶,使胰酶的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止胰酶作用,用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量的气泡,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养,隔天观察贴壁生长情况。
2)悬浮细胞传代:将细胞悬液转移到无菌离心管内,1000rpm离心5min,弃去上清,加入新鲜的培养基,用吸管小心吹散沉淀,制成细胞悬液,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养。
T7 DNA 聚合酶 ( 未修饰 ) 300U
T7 RNA 聚合酶 1000U
T7 RNA 聚合酶 25000U
T7 核酸内切酶 I 250U
T7 核酸外切酶 1000U
T7 体外转录试剂盒 50 次
T7 体外转录试剂盒 50 次
TAE 电泳液 ,50× 250mL
TAE 电泳液 ,50× 2500mL
Taq DNA 聚合酶 500U
Taq DNA 聚合酶 5000U
Taq DNA 连接酶 1000U
Taq 酶抗体 1000U
Taq 酶抗体 250U
TB1 感受态细胞 10×100μL
TB1 菌种 1mL
TBE 电泳液 ,10× 250mL
TBE 电泳液 ,10× 2500mLMMB2201 (5 mg)I-AMB; methyl (1-(5-fluoropentyl)-1H-indole-3-carbonyl)-L-valinate
Zalcitabine (100 mg)2’,3’-Dideoxycytidine|Hivid|NSC 606170|Ro 24-2027/000|ddC; 2’,3’-dideoxy-cytidine
Prothionamide (5 g)Tebeform; 2-propyl-4-pyridinecarbothioamide
5-hydroxy Tryptophol (25 mg)NSC 84416; 5-hydroxy-1H-indole-3-ethanol
Coenzyme A (100 mg)CoA; coenzyme A
NU 6027 (5 mg)6-(cyclohexylmethoxy)-5-nitroso-2,4-pyrimidinediamine
ATB-346 (5 mg)4-
PBIT (25 mg)2-
O6-Benzylguanine (50 mg)NSC 637037; 6-(phenylmethoxy)-9H-purin-2-amine
AB-CHMINACA metabolite M3A (5 mg)(1-((4-hydroxycyclohexyl)methyl)-1H-indazole-3-carbonyl)-L-valine
GSK-LSD1 (hydrochloride) (1 mg)N-[(1R,2S)-2-phenylcyclopropyl]-4-piperidinamine, dihydrochloride
n-Dodecyl-β-D-maltoside (1 g)DDM|Dodecyl Maltoside; dodecyl 4-O-α-D-glucopyranosyl-β-D-glucopyranoside
BIBR 1532omerase Inhibitor X; 2-[[(2E)-3-(2-naphthalenyl)-1-oxo-2-buten-1-yl]amino]-benzoic acid
PacritinibSB 1518; 11-[2-(1-pyrrolidinyl)ethoxy]-14,19-dioxa-5,7,27-triazatetracyclo[19.3.1.12,6.18,12]heptacosa-1(25),2,4,6(27),8,10,12(26),16E,21,23-decaene
OxolinicNSC 110364|Urinox; 5-ethyl-5,8-dihydro-8-oxo-1,3-dioxolo[4,5-g]quinoline-7-carboxylic acid
BRD73954 (10 mg)N1-hydroxy-N3-(2-phenylethyl)-1,3-benzenedicarboxamide
Asterric Acid (5 mg)Dimethylosoic Acid|RES-1214-1|TAN 1415A; 2-(2-carboxy-3-hydroxy-5-methylphenoxy)-5-hydroxy-3-methoxy-benzoic acid, 1-methyl ester
N1-Acetylspermidine (hydrochloride) (1 mg)N1-AcSPD; N-[3-[(4-aminobutyl)amino]propyl]-acetamide, dihydrochloride
TCEP 溶液,0.5M 5mL
TCEP 盐酸膦 1g
TdT 加尾法 DNA 标记试剂盒 5次
TdT 加尾法 DNA 地高标记试剂盒 5次