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更新时间:2017-01-05
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EB病毒转化的人B淋巴细胞;KMY0907图片【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗。
细胞名称 EB病毒转化的人B淋巴细胞;KMY0907图片
形态特性 淋巴母细胞样
生长特性 悬浮生长
特征特性 该细胞系来源于一无精症男性患者的外周血。2009年由中科院昆明细胞库通过EB病毒转化的方法建立。
培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS
传代方法 1:2传代;5-6天一次
传代情况 P2
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 荧光法(-)
STR -
同工酶
染色体
使用权限 A类
细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L),90%;优质胎牛血清,10%。
2、培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二、细胞处理:
1、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养)。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1)弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。 细胞到达客户手中,1个月内出现任何问题,导致细胞在冻存前死亡,我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤:
1)贴壁细胞传代:提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内,吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量PBS润洗细胞,加入适量胰酶,使胰酶的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止胰酶作用,用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量的气泡,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养,隔天观察贴壁生长情况。
2)悬浮细胞传代:将细胞悬液转移到无菌离心管内,1000rpm离心5min,弃去上清,加入新鲜的培养基,用吸管小心吹散沉淀,制成细胞悬液,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养。
5-MAPB (hydrochloride) (10 mg)1-(benzofuran-5-yl)-N-methylpropan-2-amine, monohydrochloride; 5-(2-Methylaminopropyl)Benzofuran; 5-MAPB (hydrochloride)
5-methoxy-α-Ethyltryptamine (10 mg)α-ethyl-5-methoxy-1H-indole-3-ethanamine; 5-MeO-α-ET; 5-methoxy-α-Ethyltryptamine
JWH 146 (10 mg)(1-heptyl-5-phenyl-1H-pyrrol-3-yl)-1-naphthalenyl-methanone; JWH 146
Gatifloxacin (10 g)1-cyclopropyl-6-fluoro-1,4-dihydro-8-methoxy-7-(3-methyl-1-piperazinyl)-4-oxo-3-quinolinecarboxylic acid; AM 1155|BMS 206584-01|PD 135432; Gatifloxacin
JWH 081 N-(4-hydroxypentyl) metabolite (10 mg)(1-(4-hydroxypentyl)-1H-indol-3-yl)(4-methoxynaphthalen-1-yl)methanone; JWH 081 N-(4-hydroxypentyl) metabolite
5-(N-ethyl-N-isopropyl)-Amiloride (10 mg)3-amino-N-(aminoiminomethyl)-6-chloro-5-[ethyl(1-methylethyl)amino]-2-pyrazinecarboxamide; EPIA|L-593,754|MH 12-43; 5-(N-ethyl-N-isopropyl)-Amiloride
PJ-34 (hydrochloride) (1 mg)N-(5,6-dihydro-6-oxo-2-phenanthridinyl)-2-(dimethylamino)-acetamide, monohydrochloride; PJ-34 (hydrochloride)
JNJ-1661010 (25 mg)N-phenyl-4-(3-phenyl-1,2,4-thiadiazol-5-yl)-1-piperazinecarboxamide; JNJ-1661010Citrate Buffer(100x)/柠檬酸缓冲液(IHC抗原修复液, 100x)100ml国产
小鼠结缔组织纤维细胞英文名称:LTK
786-O [786-0], 人肾透明腺细胞
人子宫内膜腺细胞英文名称:HEC-1-B
BGS琼脂/BGS Agar沙门氏菌分离培养250克国产/进口
人腺细胞英文名称:MDA-MB-453
UM-UC-3(人膀胱移行细胞)5×106cells/瓶×2
293(人胚肾细胞)5×106cells/瓶×2
大鼠角膜上细胞*培养基100mL
DNA酶琼脂/脱氧核糖核酸酶琼脂/Dnase Agar用于细菌DNA酶检测100克国产/进口
人脐静脉平滑肌细胞*培养基100mL
UVM培养基/UVM Medium李氏菌的增菌培养250克国产/进口
人肺上细胞英文名称:L132
煌绿糖胆盐肉汤/BGLB肉汤/煌绿糖胆盐增菌液/BGLB Broth用于水样中大肠菌的检测250克国产/进口
大鼠子宫成纤维细胞*培养基100mL
疱肉培养基基础/Cooked Meat Medium Base用于厌氧菌的分离培养250克国产/进口
大鼠大隐静脉平滑肌细胞*培养基100mL
硝酸盐氰化培养基基础/KCN培养基基础/Potassium Cyanide Medium Base用于鉴别肠道细菌KCN抑制试验100克国产/进口
SP Rabbit & Mouse HRP Kit(DAB)/兔&鼠通用型Streptavidin-HRP试剂盒(带DAB显色液)3ml、18ml国产
NCI-H596(人肺腺鳞细胞)5×106cells/瓶×2
P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1] (小鼠骨髓瘤细胞)5×106cells/瓶×2gersion
L-O2(人正常肝细胞)5×106cells/瓶×2
MDA-MB-231, 人腺细胞gersion
PPADS (sodium salt) (10 mg)4-[2-[4-formyl-5-hydroxy-6-methyl-3-[(phosphonooxy)methyl]-2-pyridinyl]diazenyl]-1,3-benzenedisulfonic acid, tetrasodium salt; Pyridoxalphosphate-6-azophenyl-2’,4’-disulfonic acid; PPADS (sodium salt)
Diazoxide (100 mg)7-chloro-3-methyl-1,1-dioxide-2H-1,2,4-benzothiadiazine; NSC 64198|NSC 76130|SRG 95213; Diazoxide