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更新时间:2017-02-09
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植物种属鉴定 PCR Mix 10100 次实验步骤产品及特点:
易错 PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校对功能的特性,在一定条件下(如不同的 dNTP 浓度、Mg 浓度和 MnCl2存在)能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法,则可从构建的突变库选出所需突变体。易错 PCR 和常规 PCR 的比较如下:本产品就是专门为广大的研究工作者进行易错 PCR 而开发,本产品具有下列特点:
1. 即开即用,十分简单方便,尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的*性。
2. 配方经过精心优化,突变率稳定,突变没有趋向性。易错 PCR 的突变率为 0.66% (±0.13%),详见使用手册疑难解答。
3. 比体内基因突变更快捷简单,但如果在 PCR 引物中设计位点,则可使产物克隆到表达载体,也可以用于体内蛋白活性的筛选。
4. 可用于连续易错 PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易错 PCR 的产物用作下一次易错 PCR 的模板即可,使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。
5. 只适用于扩增 1kb 以下的产物,对于 1kb 以上的产物,建议分段扩增。
植物种属鉴定 PCR Mix 10100 次实验步骤产品介绍:
规格及成分:
使用方法:
1. 以 30 uL 的标准 PCR 反应体系为例,如果反应体系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或减少。在一干净的 PCR 管中,加入下列成分:易错 PCR Mix, 10× 3 uL 易错 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自备 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自备,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 补水到 30 uL
2. 按已经优化的 PCR 条件进行一定循环数的 PCR(循环数与突变率的关系见下表),然后取 5 uL 电泳检查。如果没有优化的 PCR 条件,一般可以先尝试下面的 PCR 条件: PCR 前变性 94℃ 3 分钟易错 PCR 94℃ 1 分钟 45℃ 1 分钟 循环 30 次(见注) 72℃ 1 分钟注:易错 PCR 一般不需要热启动,也不需要在 PCR 结束后做延伸处理。
3. 电泳检测是否得到预计长度的 PCR 产物。
pRZ
pSG1154(60908-6115)
pSM214
pSupexp
pTagBFP-C(pTagBFPC)
pTK-neo
pTrxFus(60908-6690)
pUFR027
pVPack-10A1 (ViraPort)(pVPack10A1(ViraPort))
pXT7(60908-7000)
RCAS BP (A)(RCASBPA)
u-mCerulean(umCerulean)微小威斯杆菌 Weissella minor
EBV-转化人淋巴细胞英文名称:Peng
泡盛曲霉 Aspergillus awamori
橘橙链霉菌 Streptomyces aurantiacus
Yeast Protein Extraction Reagent/酵母蛋白抽提试剂25次、100次国产
圆弧青霉 Penicillium cyclopium
美味侧耳 Pleurotus sapidus
豚鼠皮肤成纤维样细胞英文名称:GPS5
HK-2, 人肾皮质近曲小管上皮细胞
烟色红曲 Monascus fuliginosus
大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
L1210(小鼠白血病细胞)5×106cells/瓶×2
泡盛曲霉 Aspergillus awamori
异型德克酵母 Dekkera anomala
HCC827(人非小细胞肺细胞)5×106cells/瓶×2
酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
YEp351
YIplac128
分子杂交炉
琼脂粉
Alkaline nutrient agar
Bacillus "racemilacticus" medium
Caldinitratiruptor medium