小鼠心脏干细胞公司其它各种产品离子通道蛋白Kv3.3抗体 副溶血性弧菌菌体鞭毛蛋白抗体
上皮细胞特异性蛋白1抗体 复制因子A蛋白2
黄体激素释放激素/促性腺激素释放激素抗体 复制激活因子C2抗体
层粘连蛋白β4抗体 复制激活因子C1抗体
蛋白赖-6-氧化酶抗体 复合型表皮生长因子样结构域蛋白5抗体

产品属性：

名称    小鼠心脏干细胞
2.组织来源：心脏组织

3.产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶

4.细胞简介：

小鼠心脏干细胞分离自心脏组织；心脏是脊椎动物身体中重要的一个器官，主要功能是为血液流动提供压力，把血液运行至身体各个部分。心脏由心肌构成，左心房、左心室、右心房、右心室四个腔组成。左右心房之间和左右心室之间均由间隔隔开，故互不相通，心房与心室之间有瓣膜（房室瓣），这些瓣膜使血液只能由心房流入心室，而不能倒流。心脏的作用是推动血液流动，向器官、组织提供充足的血流量，以供应氧和各种营养物质，并带走代谢的终产物（如二氧化碳、无机盐、尿素和尿酸等），使细胞维持正常的代谢和功能。研究发现，心脏干细胞是一种多潜能细胞，具有再生和克隆能力，并可分化为心肌细胞、平滑肌细胞和血管内皮细胞。体内研究显示，从心脏中分离出的心脏干细胞，经体外简单培养、增殖和标记后，移植到心肌梗死边缘区域，心梗血流动力学和心室壁厚度较对照组明显改善，心肌梗死边缘区域发现有标记的心肌细胞、平滑肌细胞和内皮细胞。尽管其新生心肌细胞较小，但表达一些特殊肌蛋白如心脏肌球蛋白重链、α-肌动蛋白、α-辅肌动蛋白、连接蛋白等，证实了心脏干细胞对心肌梗死的修复作用。干细胞移植治疗是目前心肌梗死和缺血性心脏病细胞重建的主要方法，成体干细胞中的c-kit阳性心脏干细胞因其来源于心脏，有定向心脏细胞系分化的趋势，体内外可以分化成心肌细胞、血管内皮细胞和平滑肌细胞，同时自体移植不存在免疫排斥反应及伦理问题已经成为目前研究的热点。短期内获得治疗量的自体心脏干细胞是这一治疗应用于临床的关键所在。因此，研究一种新的分离培养方法可在短时期内获得大量纯度较高的自体c-kit阳性心脏干细胞成为目前干细胞领域研究的热点问题之一。

5.方法简介：

公司实验室分离的小鼠心脏干细胞采用机械剪碎组织、胶原酶分次消化法结合差速贴壁、心脏干细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

6.质量检测：

公司实验室分离的小鼠心脏干细胞经c-kit免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

7.培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 长梭形

传代特性 可传2-3代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

冷冻保存细胞之方法？
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
培养操作：
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
实验报告：
产品仅用于科研一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，后将成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
木霉   甲型副伤

砖红链霉菌   平沙绿僵菌

枯草芽孢杆菌冻干粉   玉蕈、真姬菇

师岗链霉菌   恶臭假单胞菌

鲍曼不动杆菌   大肠埃希菌CMCC44102冻干粉
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