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产品型号:50次
更新时间:2022-04-22
厂商性质:经销商
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021-39596320
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产品详细介绍:
本试剂盒是整合cDNA第一链合成试剂(RT试剂盒)和即用型qPCR试剂而得的qRT-PCR试剂盒。cDNA第一链合成反应和qPCR反应分别在两个离心管中进行。 试剂盒特点: 1.即开即用,足够50次RT反应(10μL体系)和50次qPCR反应(20μL体系)。 2.RT和PCR分开进行,方便优化RT和qPCR条件,也方便一个RT反应用于多个不同引物的qPCR扩增。 3.RT mix中含除酶、模板和引物以外的RT成分,简化了反应设置步骤。 4.qPCR mix是2×预配液,也简化了反应设置步骤。 5.qPCR mix含qPCR染料,无需另外加入相关荧光PCR染料。 6.扩增效率高, 长可扩增5kbp以上的RNA。 7.提供定量PCR专用模板稀释液,保证在制作标准曲线时低浓度样品的准确性。 保存条件:-20℃保存, 有效期一年。 自备试剂:样品RNA、PCR引物、ROX染料 |
下列是产品的订购信息!产品仅用于科研
中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 货号 |
两步法RT-PCR荧光定量试剂盒 | Two-Step qRT-PCR Kit | 50次 | GOY-F10243 |
DNA提取流程图:
实验步骤
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊(25:24:1)抽提两次,:异戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
人转化生长因子α(TGF-α)ELISAKit 2-Methylanthraquinone 84-54-8 中文名:2-甲基蒽醌 分子式:C15H10O2 度:98.0% 关键词:
人主要组织相容性复合体Ⅲ类(MHCⅢ/HLA-Ⅲ)ELISA试剂盒 2-Methylsulfanylpyrimidin-4(3H)-one 5751-20-2 中文名: 分子式:C5H6N2OS
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人主要组织相容性复合体Ⅰ类elisa试剂盒 人主要组织相容性复合体Ⅰ类试剂盒 规格型号:96T/48T 人主要组织相容性复合体Ⅰ类试剂盒,规格型号:96T/48T,来源:elisa试剂盒(进口分装),产品别名:人主要组织相容性复合体Ⅰ类试剂盒、人主要组织相容性复合体Ⅰ类 elisa试剂盒 保存条件:2-8℃ 保质期:6个月。 2-Methyl-4-nitrobenzoic acid 1975-51-5 中文名: 分子式:C8H7NO4
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偶氮胭脂红B Azocarmine B 质量规格:IND 大鼠热休克蛋白70(HSP-70)ELISA检测试剂盒Ratheatshockprotein70,hSP-70ELISAKit 96T/48T
偶氮胭脂红G Azocarmine G 质量规格:BS 人雌三(E3)试剂盒 Human Esiol,E3 ELISA Kit
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血液对氧磷酶1(PON1)内酯酶活性比色法定量检测试剂盒
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血液对氧磷酶1(PON1)芳酯酶活性比色法定量检测试剂盒
组织对氧磷酶1(PON1)芳酯酶活性比色法定量检测试剂盒
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物*分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。