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3004901493
产品型号:10次
更新时间:2022-04-22
厂商性质:经销商
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021-39596320
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DNA提取流程图:
下列是产品的订购信息!产品仅用于科研
中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 货号 |
cDNA第二链合成试剂盒 | Second Strand cDNA Synthesis Kit | 10次 | GOY-F10276 |
产品详细介绍:
本试剂盒是一种在合成了cDNA第一链的基础上去除RNA-DNA杂合链中的RNA链并合成cDNA第二链,终形成双链cDNA的试剂盒。本试剂盒包含了进行cDNA第二链合成所需的各种试剂。 本试剂盒采用RNase H使RNA-DNA杂合链中的RNA产生切口,此时DNA Polymerase I可以通过切口平移(nick translation)反应催化形成cDNA第二链。 使用本试剂盒合成的双链cDNA,可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA文库的构建等。 本试剂盒用于体积为20微升的cDNA第一链合成反应的后续反应时,足够进行20个cDNA第二链样品的合成。 产品组份: RNase H(1U/μl)————————10μl DNA Polymerase I(10U/μl)———30μl Reaction Buffer(10X)——————100μl 储存条件:-20℃。 |
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物*分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
人可溶性白细胞抗原G(sHLA-G)ELISAKit Capecitabine 中文名:卡培他滨 分子式:C15H22FN3O6
人可溶性P选择素(sP-selectin)ELISAKit Tigecycline 中文名: 分子式:C29H39N5O8
人抗心0脂抗体IgM(ACA-IgM)ELISAKit Tigogenin 77-60-1 中文名:剑麻皂素 分子式:C27H44O3 度:98.0% 关键词: 毛地黄属; 万年兰属; 螺甾烷; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库
人抗心0脂抗体IgG(ACA-IgG)ELISAKit Tigogenin 77-60-1 中文名:剑麻皂素 分子式:C27H44O3
人抗心0脂抗体IgA(ACA-IgA)ELISAKit Tigogenin 中文名:剑麻皂素 分子式:C27H44O3
甲钴胺 Mecobalamin 质量规格:>98%,BR Plagrowthhormone,GHELISA试剂盒植物生长激素(GH)ELISA试剂盒规格:96T/48T
右旋酮洛芬氨丁三 (S)-Ketoprofen trometamol 质量规格:>98.5%,BR 小鼠基质细胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA试剂盒 ,英文名: SDF-1a/CXCL12 ELISA Kit
右旋酮洛芬氨丁三(标准品) (S)-Ketoprofen trometamol 质量规格:含量测定 大鼠酸激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISA检测试剂盒RatPyruvateKinase,M2-PKELISAKit 96T/48T
植物凝胶(Sigma) Phytagel 质量规格:进分;SigmaP8169 人成纤维细胞生长因子23(FGF-23)试剂盒 Human fibroblast growth factor-23,FGF-23 ELISA Kit
右旋酮洛芬 (S)-(+)-Ketoprofen 质量规格:>98.5% RatsubstancePreceptor,SP-RELISAKit大鼠P物质受体(SP-R)ELISA试剂盒规格:96T/48T
5-磺基水杨酸 sulfosalicyclic acid 质量规格:AR JM109钙转感受态细菌5X200微升
1-氨基-2-萘酚-4-磺酸 1-Amino-2-naphthol-4-sulfonic Acid 质量规格:AR Plahormoneabscisicacid,ABAELISA试剂盒植物激素脱落酸(ABA)ELISA试剂盒规格:96T/48T
利卡西平;10,11-二氢-10-羟基卡马西平 10,11-Dihydro-10-hydroxy Carbamazepine 质量规格:>98%,美国进口原装 小鼠基质细胞衍生因子1(SDF1)ELISA试剂盒 ,英文名: SDF1 ELISA Kit
三七皂苷R2(S型)(标准品) S-Notoginsenoside R2 质量规格:HPLC≥90%,标准品 人葡萄糖60酸异构酶(GPI)ELISA检测试剂盒Humanglucose-6-phosphateisomerase,GPIELISAKit 96T/48T
无水醋酸锌 Zinc acetate 质量规格:AR 大鼠纤维蛋白原β链(Fgb/Ab1-181/Ab1-216/Ac1-581)试剂盒 Rat fibrinogen beta chain ELISA Kit
cDNA第二链合成试剂盒细菌β-(β-AMYLASE)活性PNPG5酶偶联比色法定量检测试剂
真菌/酵母β-(β-AMYLASE)活性PNPG5酶偶联比色法定量检测试剂
植物β-(β-AMYLASE)活性PNPG5酶偶联比色法定量检测试剂
细菌a-(a-AMYLASE)活性比色法定量检测试剂盒
真菌/酵母a-(a-AMYLASE)活性比色法定量检测试剂盒
实验步骤
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊(25:24:1)抽提两次,:异戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)