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产品型号：5ml
更新时间：2025-04-08
厂商性质：经销商
访问量：428
服务热线021-39596320
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产品详细介绍：
快速实时荧光定量PCR预混体系是专用于染料法(SYBR GreenⅠ)实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×，包含Fast Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I荧光染料和Mg2+，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列检测。本品所含荧光染料SYBR Green I可以与所有的双链DNA相结合，使该产品可用于不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。本品含有的Fast Taq DNA Polymerase能有效减少在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活仅需在95℃孵育20s。整个PCR反应过程比普通反应可节省约40分钟，大大缩短了PCR的反应时间。PCR缓冲体系与热启动酶的组合，有效抑制了非特异产物的产生，并显著提高PCR的扩增效率。该产品应用范围广，适用于普通和快速定量PCR程序，可适用于无需ROX校正的所有荧光定量PCR仪。 ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。 注意事项： 1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。 2、本产品中含有荧光染料SYBR Green I，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。 3、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。 4、本品不能用于探针法荧光定量PCR。 储存条件：-20℃，避免反复冻融。 |
下列是产品的订购信息!
产品仅用于科研。
中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 货号 |
快速实时荧光定量PCR预混体系 | BaFaSYBR Mixture | 5ml | GOY-F10298 |
DNA提取流程图：
实验步骤：
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热，离心管中加入ME(巯基乙)，(10mL加80ul，50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了)，在液氮中迅速磨成精细粉末，装入50mL离心管，按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液，颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10min，期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)，异戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清，等体积的，异戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液，4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm，4℃离心20min
(8)弃上清，用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚异戊(25:24:1)抽提两次，异戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙，在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm，4℃离心20min
(12)弃上清，沉淀用70%酒精漂洗一次，干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
操作步骤：
1. 匀浆处理：
a.组织将组织在液氮中磨碎，每50-100mg组织加入1ml TRIzol，用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2.将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物分离。
3.可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
4. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
5. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
6. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙，室温放置10分钟。
7. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
