浮萍染料法PCR鉴定试剂盒原理是由一对引物介导，能在动植物体外对特定基因（DNA）片断进行快速酶促扩增，经过n个热循环扩增，扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的（1+E）n（0＜E＜1,扩增效率＝倍，使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。

产品特点：

本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量PCR产品。

原理是由一对引物介导，能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增，经过n个热循环扩增，扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0＜E＜1，扩增效率＝倍，使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

注意事项：

1.基础程序；

2.扩增温度和延伸温度；

3.反应时间；

4.循环次数；

5.PCR反应液的配制；

6.PCR技术的基本原理；

7.PCR的反应动力学；

8.PCR扩增产物；

9.PCR反应体系与反应条件。

浮萍染料法PCR鉴定试剂盒使用方法：

一、稀释标准曲线样品（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。

1. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。

2. 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR模板稀释液，用带芯枪头，下同）。

3. 在7号管中加入5μL阳性对照（浓度为1×10E8拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头，在6号管中加入5μL 1×10E7拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头，在5号管中加入5μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品DNA的制备

7. 用自选方法纯化样品的DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。

8. 如果有N个样品，则需要进行N+2个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。

三、设置qPCR反应（20μL体系，在样品制备室进行）

9. 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板），1个用于PCR阳性对照。

注意事项：

①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

②使用干净的塑料容器配置洗涤液。

③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器 。

⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。