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更新时间：2023-03-27
厂商性质：经销商
访问量：297
服务热线021-39596320
免疫荧光技术的实验步骤：
一、准备好试剂与仪器：
磷酸盐缓冲盐水、荧光标记的抗体溶液、缓冲甘油、搪瓷桶三只、有盖搪瓷盒一只、荧光显微镜、玻片架、滤纸、37℃温箱等。
二、实验步骤
1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待检标本片上，十分钟后弃去，使标本保持一定湿度。
2.滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一定时间以三十分钟为参考。
3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗后，再按顺序过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分钟，并不停地摇晃振荡。
4.取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片覆盖。
5.立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度。
商品属性：
产品名称 | 规格 | 产品分类 | 抗体来源 |
COBL蛋白抗体 | 50ul、100ul、200ul | 抗体 / 一抗 | Rabbit |
规格 50ul 100ul 200ul
产品分类 抗体 / 一抗
英文名称 ：Cordon bleu homolog
英文别名 ：cobL; COBL_HUMAN; DKFZp686G13227; KIAA0633; MGC131893; Protein cordon-bleu.
交叉反应 ：Human, Dog, Pig, Cow
标记 ：Unconjugated
抗体来源：Rabbit
抗体类型：Polyclonal
免疫原：KLH conjugated synthetic peptide derived from human Cordon bleu homolog
蛋白细胞定位：细胞浆,细胞膜
纯化方法：affinity purified by Protein A
亚型：IgG
性状：Liquid
浓度：1mg/ml
储存液：0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存条件：Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
背景资料 ：
Cordon-bleu, also known as COBL, is a 1,261 amino acid protein that localizes to the node of the axial midline, a structure that organizes morphoesis of the vertebrate embryo. Widely conserved and ting as five alternatively spliced isoforms, Cordon-bleu interacts with Vangl2 to mediate closure of the midbrain neural tube and is highly expressed in pancreas, ovary, brain, liver, lung and kidney. Cordon-bleu contains three WH2 domains and is encoded by a e that maps to human chromosome 7, which houses over 1,000 es and comprises nearly 5% of the human ome. Chromosome 7 has been linked to Osteoesis imperfecta, Pendred syndrome, Lissencephaly, Citrullinemia and Shwachman-Diamond syndrome. The deletion of a portion of the q arm of chromosome 7 is associated with Williams-Beuren syndrome, a condition characterized by mild mental retardation, an unusual comfort and friendliness with strangers and an elfin appearance. |
抗体制备过程：
1.材料与试剂
a．提取的动物 Ig
b．弗氏佐剂和弗氏不佐剂
d．实验动物 兔
e．其它材料及试剂
2、选择实验活体。
3、进行动物免疫实验。
4、试取血样进行测试，查看免疫效果。
5、如果免疫成功，杀死实验活体，采集全部血清。
6、纯化出抗体。
7、鉴定抗体。胎牛血清（无菌采制）
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抗体分子标记技术：
（一）原理
当应用化学氧化法时(NaI)遇强氧化剂,离子被氧化为分子,所生成的自由分子可与某些基团进行卤化反应。蛋白质分子可进行卤化反应的基团主要为残基,残基也可能进行化。在应用胺T( Chloramine T)法的实验中,所用的氧化剂(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)强挥发性的有机溶剂中。该溶剂加入试管后,先让其挥发(即让氧化剂将试管包被),然后把Na125I和蛋白质液加入包被好的试管中,反应完成即将混合液移入他管终止反应。
（二）准备
1.试剂
经亲和层析纯化的多克隆抗体或单克隆抗体；0.5mol/L磷酸钠缓冲液,pH7.5；无载体的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液；100g/L三醋酸；70%乙醇；新鲜制备的含2mg/m1络胺T的0.5mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5）；胺T反应终止缓冲液；
（三）操作要点
1.用胺T法进行化,也可在大约pH7.0的缓冲液中进行；
2.如果氧化反应损伤蛋白质，可将抗体与异硫酸荧光素(FITC)偶联)胺T量减少到0.02mg/m，并将偏重亚硫酸液的浓度降到0.024mg/ml；
3. Iodogen-包被的试管可在干燥器中,于室温下保存多年；
4.1251标记的抗体,在制备后六周内均可使用(1251的半衰期为59.6天）；
5.要注意保证所用的Na1251是新鲜的,陈旧制剂的比活性低；
6.碘化偶尔会对抗原的抗体结合位点有干扰,因此降低其结合能力,但这种情况很少见。
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