小白鼠染色体的制备实验方法和步骤

(一) 转化细胞秋水仙素处理 取骨髓前3～4小时先给小白鼠经腹腔注入0. 1％的 

秋水仙素，注射剂量为4毫克／每公斤动物体重。 
(二) 取骨髓 经秋水仙素处理的小白鼠，可用损伤脊髓法处死，然后用剪刀剪开大腿上的皮肤和肌肉，取出大腿骨和胫骨，用一小块纱布来回搓干净附在骨上的肌肉碎渣。剪掉股骨两端膨大的关节头，然后将股骨剪碎投入小烧杯中，用2毫升1％柠檬酸钠溶液搅烂碎骨，使骨髓细胞游离出来。静止片刻，用吸管把悬浮液吸到离心管中，可重复冲洗一次。此时离心管中的细胞悬浮液可达 4～5毫升。 
(三) 低渗 将所获得的转化细胞悬浮液先进行平衡(注意：每次离心前都要平衡)，然后以 1000rpm离心10分钟，吸去上清液，留0.2ml沉淀物，加0.075M KCL 溶液至8 毫升刻度，将细胞沉淀物吹散打匀，在水浴37℃ 低渗20～30分钟。 
(四) 固定 低渗处理后的材料，以1000rpm离心10分钟，吸去上清液，留0.2ml沉淀物，用吸管吹散沉淀物，沿管壁加固定液至6毫升, 冲匀后静止固定20分钟，即*次固定。按上述条件离心，去上清液，再次加入固定液至6ml，进行第二次固定。20分钟后离心吸去上清液，留0.2ml沉淀物,再往沉淀物中滴加4滴固定液，冲匀制成细胞悬液。 
(五) 滴片 取事先在冰箱中预冷的载玻片(载玻片须经硫酸洗液浸泡10天以上，经清水冲洗，用蒸馏水浸泡)，滴2～3滴细胞悬液于粘有冰水的载玻片上，用嘴吹气，使细胞迅速分散。将载片插放在切片架上晾干。 
(六) 染色 取2张制片平放在玻璃板上，用10：1 Giemsa染液染色20分钟，流水冲洗后晾干即可镜检。 
(七) 转化细胞观察 用中倍镜选择分散适度，不重迭的染色体分裂相，转高倍镜详细观察小白鼠染色体的形态特征，并计算2n的染色体数目。