质粒转染细胞实验操作步骤

1.1 转化细胞细胞铺板：将细胞按70%的汇合度接种到96孔板。
 
1.2 转染：16h后转染萤光素酶报告基因质粒和RNA，每个样品设置6个复孔
 
(1)配制DNA和转染试剂: 96孔板转染质粒时每孔比例为pLenti：Firefly：Renilla：转染试剂=0.2μg：0.1μg：0.01μg：0.25μL
 
(2)稀释好DNA及转染试剂，常温孵育5min
 
(3)将稀释好的DNA分别和转染试剂混匀，常温孵育20min
 
(4)每孔弃去15μL培养基，将15μL DNA转染混合液添加到每孔细胞样品中
 
(5)转染6h后，换新鲜*培养基
 
2 转化细胞双报告基因检测
 
(1)质粒共转染48h后，弃去培养基，用100μL 1XPBS洗1遍
 
(2)倾斜96孔板，吸干剩余的PBS
 
(3)去离子水将5XPLB稀释成1XPLB，使用前放到常温
 
(4)每孔加50μL稀释好的1X PLB，摇床常温条件下摇15min，进行裂解
 
(5)白色不透光的96孔酶标板中每孔加步骤4的上清液10μL，加入100μL预先混好的LAR II，2s后测数据
 
(6)每孔添加100μL预先混好的Stop&Glo Reagent，静止2s后，测数据转化细胞