细胞生长曲线的绘制操作步骤

ATCC细胞实验用品

材料：贴壁培养的细胞

器材：24孔培养孔板、吸管、胶帽、离心管、培养皿、半对数坐标纸、盖玻片、细胞计数板、酒精棉球、酒精灯、离心机、倒置显微镜、普通光学显微镜、超净工作台、CO2培养箱

试剂：Hanks液、DMEM培养基(含10％小牛血清)、0. 25％胰蛋白酶消化液、吉姆萨染液

实验步骤

(1)消化：用0．25％胰蛋白酶溶液消化处于对数生长期的单层培养细胞，收集消化的细胞于10 ml离心管中。

(2)离心：500～1000r／min离心5min，弃上清。

(3)加入DMEM培养基(含10％小牛血清)，制备单细胞悬液。

(4)计数：吹打均匀后对细胞进行计数。

(5)按2×104～5×104个／ml的ATCC细胞密度接种在24孔培养孔板内。

(6)每天用胰蛋白酶溶液对其中3孔细胞进行消化，镜下计数。

(7)计算3孔培养细胞数的平均值(细胞数／ml)。

(8)连续7天按上述方法消化3孔细胞并进行计数，算平均值。

(9)以培养时间作为横坐标、细胞数为纵坐标，在半对数坐标纸上，将各点连成曲线，即可获得细胞的生长曲线(图5-1)。

结果分析

培养细胞的生长曲线在正常情况下通常呈s形，观察曲线可发现，培养初期(1～2天)的细胞数约呈下降趋势，这段时期即为细胞滞留期(潜伏期)。滞留期之后的3～5天，细胞数增加显著，呈对数增长的趋势，此时细胞进入了对数生长期。当对数生长期细胞数达到高峰，细胞生长逐渐停止，细胞数量进入稳定状态，此时即为平台期(平顶期)。

注意事项

在进行生长曲线的测定时，接种到培养板孔中的细胞数量应保持每孔一致。接种量应适当，不能过少或过多，过少将使细胞生长周期延长，过多将导致细胞在实验未完成前即需传代，这两种情况下所得到的生长曲线均不能较准确地反应ATCC细胞的生长状况。