细胞分裂指数操作说明书

【实验用品】

材料：贴壁培养的ATCC细胞

器材：离心机、显微镜、血细胞计数板

试剂：Hanks液、0．25％胰蛋白酶、含10％小牛血清／胎牛血清的DMEM培养基(根据实验需要也可以是其他种类的培养基)

【实验步骤】

(1)用胰蛋白酶消化处于对数生长期的单层培养细胞，细胞置于10ml离心管中，1000r／min离心5min，弃上清。

(2)加入含血清的DMEM培养基，制备单细胞悬液。

(3)吹打均匀后，对ATCC细胞进行计数。

(4)按2x104～5x104／ml的密度将细胞接种到24孔细胞培养板中。

(5)每天用胰蛋白酶对其中3孔细胞进行消化，并进行计数；

(6)同时平行取3孔用95％酒精固定，吉姆萨或HE染色，选择细胞密度适中的区域观察分裂相细胞，至少选择3个视野，每个视野计数1000个细胞，计算出每1000个细胞中的处于分裂相细胞的平均数值进而得出分裂相所占百分比。

(7)以培养时间作为横坐标，分别以细胞分裂相百分比(左侧)与每孔测得的平均细胞数(右侧)作为纵坐标绘制曲线。

【结果分析】

将细胞分裂指数与细胞生长曲线融合在一起可以清晰地观察到ATCC细胞增殖的趋势与增殖zui旺盛的时段。