肿瘤细胞清洗与灭菌

一、肿瘤细胞实验目的

能独立地进行用于细胞培养的各种器皿的清洗与消毒，掌握干热灭菌法、湿热灭菌法和滤过除菌法的操作，了解化学消毒法的使用方法。

二、实验原理

清洗与消毒是组织培养实验的*步，是组织培养中工作量zui大，也是zui基本的步骤。体外培养细胞所使用的各种玻璃或塑料器皿对清洁和无菌的要求程度很高。细胞养不好与清洗不*有很大关系。清洗后的玻璃器皿，不仅要求干净透明，无油迹，而且不能残留任何物质。如有毒的化学物质，哪怕残留0.1个，也可能影响细胞生长。灭菌手段的选择十分重要，对不同的物品需采用不同的灭菌方法。假如选用的方法不对，即使达到了无菌却使被灭菌药品丧失了营养价值、生物学特性或其他使用价值也不行。以下在每种灭菌步骤中都介绍其使用范围。

三、实验材料、用品

1、材料：无臭氧型紫外灯，微孔滤膜(直径25)：孔径为0.22μm，微孔滤膜(直径90)：孔径为0.22 μm，过滤器(直径25)。

2、药品：70%或75%酒精，0.1%新洁尔灭，煤酚皂溶液(来苏儿水)，0.5%过氧乙酸，乳酸，37%甲醛，高锰酸钾，NaOH，盐酸，重铬酸钾，浓硫酸(工业)，DEPC水[体积分数0.1%的焦炭酸二乙酯(diethylpyroearbonate)]。

3、仪器：超净台，干燥箱，高压锅，过滤器，过滤泵。

四、实验步骤

(一)实验器具清洗

l 玻璃类 1、主要有：培养瓶，血清瓶，小青瓶，移液管，离心管，试管，培养皿等。

2、清洗步骤：

泡在含有洗洁净的自来水中→捞出来用毛刷将实验器具各个面刷洗至少25遍→自来水冲洗25遍→过一遍一蒸水→泡入铬酸,过夜(24h左右)→从铬酸中捞出器具，自来水冲洗25遍→过三遍一蒸水，三遍三蒸水→烘箱内烘干→收入柜子备用→用前高温灭菌(121℃，25min)→烘干→使用。

注意：新的玻璃器具先要泡盐酸1天，然后清洗步骤与上面相同。

l 塑料类

1 塑料类器具主要包括：孔板，大枪头，瓶盖，滤器，采血管等。

2 清洗步骤：

(1)孔板，采血管

泡在有洗洁净的自来水中→用超声清洗仪超声3遍(每遍1小时，200C)→在含有洗洁净的自来水中用毛刷或者纱布将各个面刷洗至少25遍→过一遍一蒸水→泡入盐酸过一个礼拜→从盐酸中捞出后自来水冲洗25遍→过三遍一蒸水(每遍3次)，三遍三蒸水→烘箱内烘干→收入柜子→用前包装好照钴→使用

(2)大枪头，盖子，滤器

肿瘤细胞在含有洗洁净的自来水中用毛刷或者纱布将各个面刷洗至少25遍→用超声清洗仪超声1遍(每遍45分钟，200C)→自来水冲洗→过三遍一蒸水(每遍3次)，三遍三蒸水→烘箱内烘干→收入柜子→用前包装好灭菌→使用

注意：(1)烘孔板时温度不应太高，烘干后用报纸包裹，装入箱子内，照钴，便可使用。

(2) 新的培养瓶盖子泡旧5%稀盐酸1天→再用2%NaOH煮20min →自来水冲洗→洗洁精清洗→用超声清洗仪超声1遍(每遍45分钟，200C)→冲洗15遍→过三遍一蒸(每遍3次)→过三遍三蒸水→烘干使用
1,2,4,5-环己烷四甲酸二酐(>98.0%(T))    英文名称：    1,2,4,5-Cyclohexanetetracarboxylic Dianhydride    质量规格：    >98.0%(T)            CAS号：    2754-41-8    
1,2,4,5-四甲基苯(NMR定量标准品,99.8%(GC))    英文名称：    1,2,4,5-Tetramethylbenzene    质量规格：    NMR定量标准品,99.8%(GC)            CAS号：    95-93-2    
1,2,4,5-四氯苯(标准品)    英文名称：    1,2,4,5-Tetrachlorobenzene    质量规格：    分析标准品            CAS号：    95-94-3    
1,2,4,5-四氯苯标准溶液(0.104mg/ml,基体:异辛烷)    英文名称：    1,2,4,5-Tetrachlorobenzene solution    质量规格：    0.104mg/ml,基体:异辛烷            CAS号：    95-94-3    
肿瘤细胞