15026555973

article

技术文章

当前位置:首页技术文章ATCC细胞获得无限表达所需是试剂

ATCC细胞获得无限表达所需是试剂

更新时间:2018-03-06点击次数:166

(1)ATCC细胞瞬时表达:通常可以使蛋白在细胞中暂时表达数天到数周。瞬时表达常用于验证cDNA是否能够指导蛋白的合成,比较表达同一蛋白的不同载体的有效性,在进行建立稳定转染的细胞系之前,通过瞬时表达来验证重组表达载体的正确性是十分必要的。然而,瞬时表达难以按比例产生大量蛋白质(>1mg),此外,整个细胞群体中只有部分细胞暂时得到蛋白表达,不利于细胞表型的研究。

(2)稳定表达:通过利用共转染的标记筛选系统,如G418等,对DNA转染后的哺乳动物细胞进行选择,使质粒DNA稳定整合到宿主细胞染色体上,则可以获得无限表达所需蛋白的稳定转染细胞系。

(3)诱导表达:可诱导表达系统使外源基因的表达受诱导刺激强度控制,避免持续稳定表达某些蛋白带来的细胞毒性,zui常用的是四环素(tetracyrcline,tet)调控的可诱导表达系统,具有严密、、可控制性强的优点。该系统由调节质粒和反应质粒组成,有两种调节方式:①tet-off,四环素存在时外源基因表达受抑制,而去除四环素后诱导基因表达;②tet-on则相反,培养基中有四环素时表达外源基因,无四环素时基因表达受抑制。tet-on系统更容易操作,避免诱导蛋白时清洗四环素的步骤,由于普通血清含有四环素而容易诱导不必要的蛋白表达,因此tet-on细胞需要在无四环素的血清中培养。

除了质粒表达载体以外,病毒介导的基因转移也是将外源DNA引入不同类型细胞的有效而方便的方法,痘苗病毒是常用系统之一。痘苗病毒载体中必须表达cDNA而不是基因组克隆,病毒在感染后6小时开始形成,一直持续2天。痘苗病毒表达系统能表达多个蛋白或表达多亚基酶的几个亚基,例如,ATCC细胞含有不同cDNA的DTM-1载体可以共转染到表达噬菌体T7聚合酶的细胞中以研究多种蛋白的表达,对研究多亚基蛋白复合物的组织尤其有用。
对照品    磺胺嘧啶    100mg    对照品
对照品    炔诺孕酮    100mg    对照品
对照品    甲萘醌    50mg    对照品
对照品    甲巯咪唑    100mg    对照品
对照品    甲氧苄啶    100mg    对照品
对照品    己酸羟孕酮    50mg    对照品
对照品    己烯雌酚    50mg    对照品
ATCC细胞

 

服务热线
15026555973

扫码加微信