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(1)ATCC细胞瞬时表达:通常可以使蛋白在细胞中暂时表达数天到数周。瞬时表达常用于验证cDNA是否能够指导蛋白的合成,比较表达同一蛋白的不同载体的有效性,在进行建立稳定转染的细胞系之前,通过瞬时表达来验证重组表达载体的正确性是十分必要的。然而,瞬时表达难以按比例产生大量蛋白质(>1mg),此外,整个细胞群体中只有部分细胞暂时得到蛋白表达,不利于细胞表型的研究。
(2)稳定表达:通过利用共转染的标记筛选系统,如G418等,对DNA转染后的哺乳动物细胞进行选择,使质粒DNA稳定整合到宿主细胞染色体上,则可以获得无限表达所需蛋白的稳定转染细胞系。
(3)诱导表达:可诱导表达系统使外源基因的表达受诱导刺激强度控制,避免持续稳定表达某些蛋白带来的细胞毒性,zui常用的是四环素(tetracyrcline,tet)调控的可诱导表达系统,具有严密、、可控制性强的优点。该系统由调节质粒和反应质粒组成,有两种调节方式:①tet-off,四环素存在时外源基因表达受抑制,而去除四环素后诱导基因表达;②tet-on则相反,培养基中有四环素时表达外源基因,无四环素时基因表达受抑制。tet-on系统更容易操作,避免诱导蛋白时清洗四环素的步骤,由于普通血清含有四环素而容易诱导不必要的蛋白表达,因此tet-on细胞需要在无四环素的血清中培养。
除了质粒表达载体以外,病毒介导的基因转移也是将外源DNA引入不同类型细胞的有效而方便的方法,痘苗病毒是常用系统之一。痘苗病毒载体中必须表达cDNA而不是基因组克隆,病毒在感染后6小时开始形成,一直持续2天。痘苗病毒表达系统能表达多个蛋白或表达多亚基酶的几个亚基,例如,ATCC细胞含有不同cDNA的DTM-1载体可以共转染到表达噬菌体T7聚合酶的细胞中以研究多种蛋白的表达,对研究多亚基蛋白复合物的组织尤其有用。
对照品 磺胺嘧啶 100mg 对照品
对照品 炔诺孕酮 100mg 对照品
对照品 甲萘醌 50mg 对照品
对照品 甲巯咪唑 100mg 对照品
对照品 甲氧苄啶 100mg 对照品
对照品 己酸羟孕酮 50mg 对照品
对照品 己烯雌酚 50mg 对照品
ATCC细胞