ATCC细胞转染方案

ATCC细胞建立一套适当的转染方案;首先从一种标准方案开始，然后通过改变试剂/DNA的配比和形成复合物的数量进行优化。

转染复合物的制备— 诸如转染试剂/DNA配比，离子强度，缓冲液pH值，以及温度等变量都会影响到转染复合物的组成和功能。质粒既可在无菌水又可在TE缓冲液中稀释。如果您要使用一种市售的转染试剂，就应当仔细阅读该试剂所提供的使用说明。需要对试剂提供方给予一定的信赖;除非您有很好的理由支持您做出改变，否则就应当严格按照他们所推荐的转染方案。在不含血清或其他蛋白的培养基中制备转染复合物;如果制备复合物所使用的培养基含有血清，它就会对转染产生抑制。

制备转染复合物的*孵育时间是一个非常关键的环节，对于不同的转染试剂而言可能差别很大。

转染试剂/DNA配比(负载比)—所有的转染试剂都会在某一个试剂/DNA配比时zui为有效。有时候这种*配比的所在范围非常狭窄;而且对于每种实验体系都必须进行优化才能得到*配比。为了寻找这种*配比往往会花费大量的时间和金钱。

除了配比的重要性之外，所加入转染复合物量的多少也非常关键。

ATCC细胞形成转染复合物所用的稀释剂—对于多数试剂而言，很关键的一点是要使转染复合物能在普通基础培养基和盐溶液中形成。

FuGENE® HD 转染试剂则是一个例外，因为它能在水中、不会血清的培养基中或含有10%血清的培养基中生成复合物。如果您使用的是水或含有10%血清的培养基，则应保证它能适用于你特定的细胞体系。

复合物数量—对转染细胞所用的转染试剂/DNA复合物的量也应当进行优化。如果用量太少，那么转染DNA的表达就太弱;如果用量太多，则可能由于细胞毒性或其他作用反而降低蛋白的表达。*用量通常都必须进行实验来确定。

所需要的转染复合物用量与所用细胞的数量相关。转染细胞越少，所需复合物就越少。

转染复合物的加入—有两种替换方法可用来浆转染复合物加入转染细胞：1. 将复合物浓缩液逐滴加入培养基，或者2. 将转染复合物先用培养基稀释，然后进行培养基更换操作。*种方法更简便，而第二种方法则更因为避免了试剂在局部浓聚而产生毒性，所以会使结果的一致性更好。

对于诸如FuGENE® 6 转染试剂和HD转染试剂这类的温和试剂而言，您可以先将转染复合物加入培养容器，然后再加入用胰蛋白酶新鲜消化得到的细胞。

转染培养基— 转染过程中所使用的培养基对转染效率可能会有正面或负面的影响。甚至对于基础培养基配方而言也是如此，尤其是在培养基中加入牛血清的情况下。胎牛血清的存在会使多种转染试剂的转染效率降低. 某些公司还提供可与转染试剂配合使用的优化无血清转染培养基。而由罗氏应用科学部所提供的转染试剂则无论是否存在血清都能有效转染。

FuGENE® H D是*的能够转染保存在100%血清中肿瘤细胞的转染试剂。

如果有抗生素(如，青霉素、链霉素、或两性霉素B)存在的情况下培养ATCC细胞，则转染有效性会降低至25%。因此，对于瞬时转染，我们建议使用不加抗生素的培养基。

高密度聚乙烯Polyethylene, High Density9002-88-4

L-焦谷氨酸;L-焦性麸质酸;L-焦性胶氨酸;L-2-吡咯烷酮-5-羧酸L-PyroglutaMic acid;L-GlutiMinic acid;GlutiMic acid;GlutaMic acid lactaM;α- AMinoglutaric acid lactaM;L-5-Oxo-2-pyrrolidine carboxylic acid;(S)-(-)-2-Pyrrolidone-5-carboxylic acid98-79-3

L-苏氨酸;L-异赤丝藻氨基酸L-Threonine;L-β-Hydroxy-2-aMinobutyric acid;(2S,3R)-2-AMino-3-hydroxybutyric acid;(2S,3R)-(-)-Threonine72-19-5

L-甲状腺素钠;L-甲状腺胺钠;3,5,3′,5′-四碘甲状腺-L-原氨L-Thyroxine sodiuMsalt;3,3′,5,5′-Tetraiodo-L-thyronine sodiuM salt pentahydrate;SodiuM levothyroxine;Levothyroxine sodiuM;Eltroxin;Thyroxevan;25416-65-3

L-甲状腺素;3,5,3′,5′-四碘-L-甲状腺原氨酸;3-[4-(4-羟基-3,5-二碘苯氧基)-3,5-二碘苯基]-L-丙氨酸L-Thyroxine;3-[4-(4-Hydroxy-3,5-diiodophenoxy)-3,5-diiodophenyl]-L-alanine;β-[(3,5-Diiodo-4-hydroxyphenoxy)-3,5-diiodophenyl]-L-alanine51-49-0

L-酪氨酸;;;L-β-对羟苯基-α-氨基丙酸;L-干酪氨基酸L-Tyrosine;(S)-2-AMino-3-(4-hydroxyphenyl)propionic acid;3-(4-Hydroxyphenyl)-L-alanine;L-α-AMino-β-p-hydroxyphenylpropionic acid;L-α-AMino- p-hydroxyhydrocinnaMic acid60-18-4

淋巴细胞分离液LyMphocyte separation Media;

麦康凯琼脂;麦康克琼脂Mac Conkey agar;

氟化镁MagnesiuM fluoride;Afluon;Sellaite7783-40-6

氢氧化镁MagnesiuM Hydroxide (AS);Marinco H1309-42-8

硬脂酸镁MagnesiuM Stearate (AS);DoloMol577-04-0

七水合硫酸镁Magnesium sulfate10034-99-8

三硅酸镁;三硅酸二镁;硅酸镁;弗罗里硅土;硅镁型吸附剂MagnesiuM trisilicate;MagnesiuM silicate;MagnesiuM Mesotrisillicate14987-04-3

苹果酸Malic Acid;4455-77-0

丙二酰胺MalonaMide;PropanediaMide;108-13-4

丙二腈 99％Malonic acid141-82-2

丙二腈;氰化亚甲基;二氰甲烷;氰基乙腈;缩苹果腈Malonitrile;Methylene cyanide;DicyanoMethane;Cyanoacetonitrile109-77-3

acid;Phenylhydroxyacetic acid;Phenylglycolic acid;α-Hydroxybenzeneacetic acid;dl-Mandelic acid90-64-2