AtT-20小鼠垂体瘤细胞培养方法

AtT-20小鼠垂体瘤细胞培养方法

在成功复苏并传代培养Att-20细胞后，需重点关注其生长状态和培养环境的稳定性。Att-20细胞贴壁生长，通常呈多边形或梭形，若观察到细胞形态异常或大量悬浮死亡，需排查培养基成分、血清质量或污染问题。

培养条件优化

1. 培养基选择：高糖DMEM（含10%胎牛血清）是常用基础培养基，但可尝试添加1%非必需氨基酸（NEAA）或2mM L-谷氨酰胺以促进增殖。

2. 传代操作：细胞密度达80%-90%时需传代，使用0.25%胰酶（含EDTA）消化1-2分钟，轻柔吹打避免成团。离心后按1:3至1:4比例接种至新培养瓶。

3. 冻存要点：冻存液需含10% DMSO和90%血清，程序降温后液氮保存，避免反复冻融。

常见问题解决

- 生长缓慢：检查血清批次活性或补充5 ng/mL bFGF（碱性成纤维细胞生长因子）。

- 聚集成团：缩短消化时间或改用低浓度胰酶（0.05%）。

- 支原体污染：定期PCR检测，必要时使用抗生素如Plasmocin处理。

应用提示

Att-20细胞常用于激素分泌研究（如ACTH），实验前需确保细胞状态稳定，建议同步设置空白对照组。通过优化培养细节，可显著提高实验重复性与数据可靠性。