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转化细胞铺匀的技巧

更新时间:2018-04-16点击次数:320

转化细胞实验,细胞铺板大概是zui常见的一个实验了。但是有很多人不是很得要领,铺得不是均匀:要么中间密周围稀,要么周围密中间秃顶。以下是我的一些技巧,希望可以帮助到大家。
1.一般96孔板我每孔是加100微升细胞悬液,从孔的左边靠近底部加入,加完半边板后,将未加的细胞悬液混一下再,继续加剩余的半边板子,都加完后盖上盖子,左手轻轻扶住板的左边,右手轻轻敲击板的右边缘,注意把握力度(我一般轻巧敲三下),太强或次数太多会导致细胞集中成堆,将板顺时针旋转(逆时针效果不好),依次敲击剩余三个边,静置约5分钟,放入37度培养箱。
6孔板12孔板或24孔板,我均采用将*个孔加入少量无血清培养基,晃动浸润整个孔底,然后用移液枪吸至第二孔,同样方法浸润孔底,其它孔一次类推,这样整个孔底都是湿润的,细胞悬液会平铺在整个孔底,加细胞悬液的时候可以避免加在中间中间细胞多,而加在周边晃匀后周边细胞多中间少的现象,细胞分散较均匀,注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下。这个方法就是有点慢,但操作熟练了也不慢。也可以采用轻拍的方式,但力度没有96孔板好掌握,效果没有96孔板好,所以我放弃改用浸润孔底的方法。
2. 细胞实验中细胞悬液加完后,将细胞培养板抬高,对着灯光,从底部往上看,看细胞有没有抱团。然后从底部敲击,使之分散。
3.如果实验室有平板振荡器的话,我建议用这个仪器稍振荡一下,效果不错,就是振幅小,频率高的那种。
4.转化细胞实验中细胞要尽量打散,大部分呈单个状态。离心后,要充分悬浮!还有转移到六孔板后,是要晃得!晃的时候不要让那个细胞液转圈,不然细胞就全被带到中间去了,就会不均匀!
100215-200601    检查用    100mg    乙羟茶碱
100216-200702    含量测定    100mg    盐酸安他唑啉
100218-199601    含量测定    50mg    盐酸美西律
100219-199902    含量测定    50mg    盐酸酚苄明
100222-200702    鉴别    50mg    盐酸罗通定
100223-200102    含量测定    50mg    盐酸维拉帕米
100224-200903    含量测定    100mg    异维A酸
100225-200502    含量测定    100mg    贝诺酯
100226-200404    含量测定    50mg    半乳糖
100227-201001    供UV法含量测定    30mg    醋酸去氧皮质酮
100228-199802    含量测定    50mg    醋酸甲萘氢醌
100229-200803    HPLC法含量测定    100mg    富马酸氯马斯汀
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