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对干细胞进行单个分离、研究、和比较有助于细胞异质性和基因组不稳定研究。zui常见的单细胞测序应用是在肿瘤研究领域。哈佛大学终身教授、美国科学院院士谢晓亮教授是单细胞测序其中一种技术路线的人。
2015年谢教授课题组在单细胞全基因测序研究领域曾取得重要进展,利用“eWGA”扩增方法,大幅提高了扩增的均匀性和准确性,可同时检测出单细胞中的小片段拷贝数变异和高精度的单核苷酸变异,该方法还具有基因组的高覆盖率,有效降低外源污染。
这是一项经过改良的单细胞全基因组扩增(whole-genome amplification,WGA)方法,被称为“通过转座子插入的线性放大(Linear Amplification via Transposon Insertion,LIANTI)”。利用Tn5转座子(含T7启动子)随机将DNA切碎,使得DNA样本得以线性放大。
WGA是单细胞测序技术的关键。目前的WGA技术方法仍存在一些局限性,比如准确度、基因拷贝数空间分辨率、保真度都有待提高。
为了应对这些问题,不仅需要从技术改进下手,谢教授课题组还提出了“构建无偏见细胞基因组文库(making an unbiased library)”的概念。
研究还发现,干细胞基因组中所观察到的主要的胞嘧啶到胸腺嘧啶(C-T)的突变,通常起因于人工进行的细胞裂解操作,这一操作导致了胞嘧啶的脱氨基作用。至于如何改善这种不可避免的误差。研究人员提出可以通过与同类细胞的序列进行比较得以修正。本篇报道已鉴定出单个人类细胞的SNVs频谱,揭示了SNVs在全基因组内的非随机分布。
1,3-二硝基苯 标准品 CDCP-O-815-5g 乙酰丙酮 1ml 5g
L-(+)-谷氨suan CDCP-O-807-10g 异佛尔酮 1g 10g
邻苯二甲suan二异丁酯(DIBP) ... CDCP-O-48-10g 葡萄糖suan 10ml 10g
沙丁胺醇(无证书) 标准品 CDCP-O-416-10G 醋suan异辛酯 50mg 10g
乙醛 CDCP-O-362-5g 3-lv苯胺 1g(4℃保存),有证书 5g
乙醛 CDCP-O-2344-5g 3-lv苯酚 1000ug/ml于乙腈,5ml 5g