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干细胞通常对PH和温度变化较为敏感。让细胞在每个阶段都至少有一个适应过渡期。
细胞存活率和细胞密度
细胞在对数生长期中期快速分裂,且在适应过程开始时,存活率大于90%。这一点至关重要。当细胞需传代时,建议采用1:2或1:3的小传代比例,以维持更高的细胞密度,同时提供隔绝期间可能有助于细胞的细胞生长因子。当细胞适应新的培养条件时,在增大细胞传代密度。
细胞生长
如果在适应过程中,细胞停止了生长,则需让细胞有更多的时间来适应培养基组合。例如,在方法1的阶段4,向无血清培养基添加少量的血清(1-3%)。这样有助于细胞更容易地适应新的培养基。然后,在几个过渡期内,缓慢地减少血清量,直至学清量为0。
悬浮培养物
Meiatech公司的无血清培养基和无蛋白培养基不含血清中所发现的细胞附着延伸影子。在一段过渡期内,贴壁细胞将开始离开表面,并成为悬浮细胞系开始生长。细胞也可能因适应而发生形态变化。监测细胞的生长速度,只要细胞能够与新系统相融合,任何形态变化都不重要。
细胞丛
在适应于无血清培养期间,细胞容易形成丛。传代培养时,将丛轻轻折断,使其分散开。将培养物从静止细胞培养瓶内转移到可旋转锥形瓶内,这样可能会有助于防止细胞丛的形成。
抗生素
由于血清蛋白易于粘合到抗生素上,因此,不建议在无血清适应过程中使用抗生素。如不存在血清蛋白,则抗生素水平可能会对细胞产生毒性。
预防措施
确保在开始适应过程前,储存有大量原培养基的细胞。如果干细胞没有存活到下一阶段,则在整个过程中保存每一阶段使用的培养瓶。
乙酰哈巴苷 20mg 供含量测定 111925-201001
醋酸甲羟孕酮 100mg 含量测定 100001-200504
安乃近 500mg 含量测定 100002-200605
(+)2-氨基丁醇 100mg 含量测定 100003-200703
苯丙酸诺龙 100mg 含量测定 100004-200603
苯丁酸氮芥 50mg 含量测定 100005-199402
苯甲酸雌二醇 100mg 含量测定 100006-200504
苄氟噻嗪 100mg 含量测定 100007-200703
干细胞