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更新时间：2017-01-05
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人类成纤维细胞系；CNLMG-B5538SKIN图片【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。
细胞名称 人类成纤维细胞系；CNLMG-B5538SKIN图片
形态特性 成纤维细胞样
生长特性 贴壁生长
特征特性 该细胞属专利保藏，其特征特性尚未公开。
培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
传代方法 1:3传代，3-4天传1次
传代情况 C8
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR
同工酶
染色体
使用权限 未定
细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。 细胞到达客户手中，1个月内出现任何问题，导致细胞在冻存前死亡，我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤：
1）贴壁细胞传代：提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内，吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞，加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用，用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
2）悬浮细胞传代：将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min，弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。
蓝胶琼脂糖 50mL
蓝色葡聚糖 2000 1g
酪氨酸脱羧酶 25U
酪蛋白 50g
酪蛋白 50g
酪蛋白溶液 (PBS) 100mL
酪蛋白溶液 (TBS) 100mL
冷冻型血液 RNA 保存液 100mL
冷启动核酸酶 10,000U
离析酶 R-10 1g
丽春红 S 10g
丽春红 S 染膜液 250mL
利福平 250mg
利福平溶液 ,100mg/mL 10mL
链激酶 100μg
链霉蛋白酶 E 250mg
链霉菌 PCR Mix 6 100 次
链霉亲和素 1mgBAY-85-3934 （10 mg）Molidustat； 1,2-dihydro-2-[6-（4-morpholinyl）-4-pyrimidinyl]-4-（1H-1,2,3-triazol-1-yl）-3H-pyrazol-3-one
YZ9 （50 mg）7-hydroxycoumarin-3-Carboxylic Acid ethyl ester； 7-hydroxy-2-ozo-2H-1-benzopyran-3-carboxylic acid, ethyl ester
ML-60218 （10 mg）2-chloro-N-[3-（5-chloro-3-methylbenzo[b]thien-2-yl）-1-methyl-1H-pyrazol-5-yl]-benzenesulfonamide
Apixaban （50 mg）BMS 562247-01|Eliquis； 4,5,6,7-tetrahydro-1-（4-methoxyphenyl）-7-oxo-6-[4-（2-oxo-1-piperidinyl）phenyl]-1H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-3-carboxamide
Zidovudine （1 g）AZT|Azidothymidine|NSC 602670|Retrovir|ZDV； 3’-
Diclazepam （10 mg）2’-Chlorodiazepam|Ro 5-3448； 7-chloro-5-（2-chlorophenyl）-1,3-dihydro-1-methyl-2H-1,4-benzodiazepin-2-one
Conoidin A （250 mg）2,3-bis（bromomethyl）-quinoxaline 1,4-dioxide
Mescaline （hydrochloride） （exempt preparation） （1 mg）NSC 30419|TMPEA； 3,4,5-trimethoxy-benzeneethanamine, monohydrochloride
Ivabradine （hydrochloride） （250 mg）S 16257； 3-[3-[[[（7S）-3,4-dimethoxybicyclo[4.2.0]octa-1,3,5-trien-7-yl]methyl]methylamino]propyl]-1,3,4,5-tetrahydro-7,8-dimethoxy-2H-3-benzazepin-2-one, monohydrochloride
Edrophonium （chloride） （100 mg）Enlon|Tensilon； N-ethyl-3-hydroxy-N,N-dimethyl-benzenaminium, monochloride
MF498 （10 mg）N-[[[4-（5,9-diethoxy-6,8-dihydro-6-oxo-7H-pyrrolo[3,4-g]quinolin-7-yl）-3-methylphenyl]methyl]sulfonyl]-2-methoxy-benzeneacetamide
Zalcitabine （250 mg）2’,3’-Dideoxycytidine|Hivid|NSC 606170|Ro 24-2027/000|ddC； 2’,3’-dideoxy-cytidine
Cefpodoxime （free acid） （10 mg）R 3763； （6R）-7R-[[（2Z）-2-（2-amino-4-thiazolyl）-2-（methoxyimino）acetyl]amino]-3-（methoxymethyl）-8-oxo-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylic acid
N-Acetyl-4-benzoquinone imine （1 mg）N-Acetyl-p-benzoquinonimine|NAPQI； N-（4-oxo-2,5-cyclohexadien-1-ylidene）-acetamide
链霉亲和素，AP 标记 0.5mL
链霉亲和素，HRP 标记 0.1mL
链霉亲和素磁珠 2mL
链脲佐菌素 100mg
链脲佐菌素溶液 ,10mg/mL 10mL
链亲和素 0.1mg
