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更新时间:2017-01-23
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绵羊肺细胞;OAR-L1说明书【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗。
细胞名称 绵羊肺细胞;OAR-L1说明书
形态特性 成纤维细胞样
生长特性 贴壁生长
特征特性 该细胞系来源于一雌性绵羊的肺组织。1990年由中国科学院昆明细胞库建立。
培养条件 McCoy's 5A Media (Modified with Tricine) 15%NBS
传代方法 1:2传代;3-4天一次
传代情况 P2
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 荧光法(-)
STR -
同工酶
染色体
使用权限 A类
细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L),90%;优质胎牛血清,10%。
2、培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二、细胞处理:
1、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养)。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1)弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。 细胞到达客户手中,1个月内出现任何问题,导致细胞在冻存前死亡,我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤:
1)贴壁细胞传代:提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内,吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量PBS润洗细胞,加入适量胰酶,使胰酶的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止胰酶作用,用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量的气泡,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养,隔天观察贴壁生长情况。
2)悬浮细胞传代:将细胞悬液转移到无菌离心管内,1000rpm离心5min,弃去上清,加入新鲜的培养基,用吸管小心吹散沉淀,制成细胞悬液,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养。
Raji(人Burkitt's淋巴瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 gersion
Dami(人巨核细胞白血病细胞) 5×106cells/瓶×2
MSTO-211H(人肺细胞) 5×106cells/瓶×2 gersion
RH-35(大鼠肝细胞) 5×106cells/瓶×2
II型胶原酶(含100mL酶解缓冲液) 10mL
CHL(仓鼠肺细胞) 5×106cells/瓶×2
Flag Tag IP/Co-IP Kit/Flag标签免疫沉淀试剂盒 25次 试剂盒
小鼠食管上细胞*培养基 100mL
BC-019(人腺细胞) 5×106cells/瓶×2
小鼠肠上细胞*培养基 100mL
胰酶细胞消化液 规格: 100ml
人胎盘绒毛膜细胞*培养基 100mL
MCPC培养基添加剂/MCPC Medium Supplement 每瓶添加于100ml MCPC培养基中 国产/进口 5毫升
人卵巢细胞 英文名称: HO-8910
大肠杆菌&大肠菌群显色培养基/E.Coli&Coliform Chromogenic Medium 同时检测大肠菌群和大肠杆菌,培养24小时,大肠杆菌显紫色,大肠菌群显红色 国产/进口 1升
尼氏(Nissl)染色液 规格: 100ml
赖氨酸脱羧酶培养基/Lysine Decarboxylase Medium 用于细菌赖氨酸脱羧酶试验 国产/进口 5克 琼脂糖凝胶 2B CAS9050-94-6 100mL
SDS-PAGE 分离胶配胶液 100868-500 500mL
10 次 柱式植物 mtDNAout,测序
10g 硫酸葡聚糖
5 mg 羧肽酶 B( 猪胰 )
50 T ATP 酶测试盒 ( 组织及细胞膜需高速离心 )
羧肽酶 B( 猪胰 ) CAS9025-24-5 5 mg
山羊抗小鼠 IgG(H+L), 碱性磷酸酶标记 131144-100 100μL
大提柱式动物 RNAout 80901-5 5次
50 次 木材 DNAout
10g 4- 甲基伞形酮
5mL 卵巢上皮细胞生长因子
1.5mL β- 乙醇,电泳
尿道上皮细胞生长因子 21-0240-5 5mL
RNase-free Tris HCl,1M,pH 6.5 60704-100 100mL
2mg PD 98059(MAPKK 抑制剂 )
250 mL Baker 甲醛钙中性固定液
18mg Insulin
100g RNA EDTA·2Na ( 乙二胺四二 )
L-Arginine(NO 前体 ) 23-0360-5 5g
柱式尿液 DNAout 90314-50 50 次
100mL RNA 电泳液 ,10×
100 μL COX IV 小鼠单抗
5mL dNTP 溶液,2.5mM