猪肾细胞；LLC-PK1说明书售后：收到细胞后7天，如发现细胞有质量问题（如污染，死亡，快递运输等原因）时，应出具书面质量问题报告并及时传真致销售人员，我们将尽快为您解决。

猪肾细胞；LLC-PK1说明书【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。

细胞名称 猪肾细胞；LLC-PK1说明书
形态特性  上皮样
生长特性 贴壁生长
特征特性  该细胞源自3~4周龄的Hampshire猪肾组织，可产生纤溶酶原激活物。 
培养条件  M-199: with Earle's Balanced Salts Solution (EBSS)  3%FBS
传代方法  1:3~1:6传代；2~3天1次。
传代情况 C6
冻存条件  基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法（-）
STR  -
同工酶 
染色体  32~40
使用权限 A类

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:    
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。   细胞到达客户手中，1个月内出现任何问题，导致细胞在冻存前死亡，我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤：
1）贴壁细胞传代：提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内，吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞，加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用，用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
2）悬浮细胞传代：将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min，弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。

dATP 溶液，100mM    120615-0.5    0.5mL
500g    铁氰化    
100mL    二甲基亚砜    
100 次    一步式胞浆蛋白微量制备试剂盒    
10 次    小 RNA 克隆试剂盒    
3- 氨基 -9- 乙基咔唑    CAS132-32-1    5g
植物种属鉴定 PCR Mix 11    131129K-100    100 次
50 次    细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-PE）    
250g    干粉型 SOB 培养基    
10mL    焦碳酸二乙酯    
5次    大提柱式 Ti 质粒 DNAout    
L- 半胱氨酸    CAS52-90-4    25g
HB101 种    12-47    1mL
100mL    YPDG 液体培养基    
1mL    环孢 A 溶液 ,10mg/mL    
10g    茚三酮    
20 次    天净沙 SPIA 扩增试剂盒 ( 用于扩增 DNA 模板 )    
糖原Ⅲ型    CAS9005-79-2    500mg
氨苄青干粉    60101-1    1g
100mg    遗传    
50 次    酵母 DNAout    
1g    3,3’,5,5’- 四甲基联苯胺二盐酸    
人大肠细胞    英文名称：        PA319    
桔汁琼脂/Orange Serum Agar    饮料中耐酸细菌的分离培养    国产/进口    250克    
大鼠小肠血管内细胞*培养基    100mL            
强化梭菌琼脂/RCA/RCM Agar    梭菌的分离培养    国产/进口    250克    
YAC-1(小鼠淋巴瘤细胞)    5×106cells/瓶×2            
羊胆盐/Bile salt from sheep    BR    国产/进口    25克    
SF767(人脑瘤细胞)    5×106cells/瓶×2            
NCI-H1688(人典型小细胞肺细胞)    5×106cells/瓶×2            
NC膜(0.22um)    30cm × 3m，15cm x 20cm    gersion    30cm × 3m，15cm x 20cm    
A2(人腺样囊性细胞)    5×106cells/瓶×2            
LS 180(人结肠腺细胞)    5×106cells/瓶×2            
HSC-T6(大鼠肝星形细胞)    5×106cells/瓶×2            
HCT116/人结肠细胞    株        国产    
植物蛋白提取试剂（带酶抑制剂）    100次        国产    
Calu-3(人肺腺细胞)    5×106cells/瓶×2            
人关节软骨细胞*培养基    100mL            
Hce-8693(人盲肠腺细胞(未分化))    5×106cells/瓶×2            
CLED培养基添加剂/CLED Medium Supplement    加入100mlC.L.E.D培养基中    国产/进口    1毫升×5支    
小细胞肺    英文名称：        NCI-H345（悬浮）    
C127(小鼠腺细胞)    5×106cells/瓶×2            
小鼠肝细胞    英文名称：        H22