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更新时间:2017-01-23
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非洲绿猴肾细胞;CV-1说明书【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗。
细胞名称 非洲绿猴肾细胞;CV-1说明书
形态特性 成纤维细胞
生长特性 贴壁生长
特征特性 CV-1细胞株源自成年雄性非洲绿猴的肾,用于Rous肉瘤病毒的转染研究。
培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 胎牛血清,10%
传代方法 消化3-5分钟。1:2。3天内可长满。
传代情况 PN5
冻存条件 *培养基+8%DMSO
支原体检测 阴性
STR
同工酶
染色体
使用权限 A类
细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L),90%;优质胎牛血清,10%。
2、培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二、细胞处理:
1、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养)。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1)弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。 细胞到达客户手中,1个月内出现任何问题,导致细胞在冻存前死亡,我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤:
1)贴壁细胞传代:提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内,吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量PBS润洗细胞,加入适量胰酶,使胰酶的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止胰酶作用,用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量的气泡,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养,隔天观察贴壁生长情况。
2)悬浮细胞传代:将细胞悬液转移到无菌离心管内,1000rpm离心5min,弃去上清,加入新鲜的培养基,用吸管小心吹散沉淀,制成细胞悬液,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养。
EBV-转化人淋巴细胞(彝族) 英文名称: KM9304
小鼠腺上细胞*培养基 100mL
Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡检测试剂盒 规格: 100次以上
小鼠艾氏腹水细胞 英文名称: EAC
3% NaC1V-P半固体发酵管 BR 国产/进口 20支
人肾足突细胞*培养基 100mL
Mtsb肉汤/改良胰蛋白胨大豆肉汤/改良胰酪胨大豆肉汤/改良胰酶大豆汤/Mtsb Broth With Novobiocin/Modified Tryptic Soy Broth 大肠杆菌O157选择性增菌 国产/进口 250克
人结肠长春新碱耐药株 英文名称: HCT-8/V
叠氮钠葡萄糖肉汤/Azide Dextrose Broth 链球菌、肠球菌、粪链球菌的增菌培养 国产/进口 250克
考马斯亮蓝R-250 10g 国产
滤膜肠球菌琼脂/M-肠球菌琼脂/M-Enerococcus Agar 用于滤膜法或直接平板法,从自来水、食品或其他标本中分离肠球菌 国产/进口 250克
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沙氏1%葡萄糖琼脂培养基/Sabouraud,s 1% Dextrose Agar 上培养增菌的标准培养基,用于深浅部真菌的分离培养 国产/进口 250克
TT(人甲状腺导管细胞) 5×106cells/瓶×2
WPMY-1(人正常前列腺基质永生化细胞) 5×106cells/瓶×2
293ET(人胚肾细胞(SV40T和EBNA1基因修饰细胞)) 5×106cells/瓶×2
大鼠淋巴管内细胞*培养基 100mL
H4-IIE(大鼠肝细胞 ) 5×106cells/瓶×2
梭菌培养基/Reinfored Medium For Clostridia 用于梭菌检查 国产/进口 250克
Tca-8113(人舌鳞细胞) 5×106cells/瓶×2
SNU-5(人胃细胞) 5×106cells/瓶×2 生物素化的牛血清白蛋白 131094-25 25mg
Real-Time PCR 稀释液 130816-1 1mL
1mg U0126(MEK1/2 抑制剂 )
250mL 非蛋白型 Western 封堵液
125mg 博莱
30μg φX174RF Ⅱ DNA
L- 精氨 CAS1119-34-2 25g
质粒 ( 载体 ) 系列产品 60908-2 2μg
500mg 硝苯吡啶
250mL 固相 RNase 清除剂
250g 聚乙二醇 12000
50 次 酵母 DNAout
腐胺 CAS110-60-1 5g
SG1117 种 12-251 1mL
5次 一步法96 孔板单落质粒DNAout( 离心法)
100g 肌醇
5mg 氨基喋呤
100 次 蛋白折叠试剂盒
羟基脲 CAS127-07-1 1g