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更新时间:2017-01-23
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猴胎肾细胞;MARC145/Gal-8说明书【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗。
细胞名称 猴胎肾细胞;MARC145/Gal-8说明书
形态特性 上皮样
生长特性 贴壁生长
特征特性 该细胞属专利保藏,其特征特性尚未公开。
培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
传代方法 1:3传代,3-4天传1次
传代情况 C5
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR
同工酶
染色体
使用权限 未定
细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L),90%;优质胎牛血清,10%。
2、培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二、细胞处理:
1、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养)。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1)弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。 细胞到达客户手中,1个月内出现任何问题,导致细胞在冻存前死亡,我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤:
1)贴壁细胞传代:提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内,吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量PBS润洗细胞,加入适量胰酶,使胰酶的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止胰酶作用,用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量的气泡,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养,隔天观察贴壁生长情况。
2)悬浮细胞传代:将细胞悬液转移到无菌离心管内,1000rpm离心5min,弃去上清,加入新鲜的培养基,用吸管小心吹散沉淀,制成细胞悬液,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养。
三叶草根瘤菌 Rhizobium trifolii
SW 982(人滑膜肉瘤细胞)5×106cells/瓶×2
植物杆菌 Lactobacillus plantarum
粗柄羊肚菌 Morchella crassipas
人小脑颗粒细胞*培养基100mL
PANC-1, 人胰腺细胞 Human
地衣芽孢杆菌 Bacillus licheniformis
大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
Caki-1(人肾透细胞细胞)5×106cells/瓶×2
爪哇根霉 Rhizopus javanicus
微黄八叠球菌 Sarcina subflava
D283 Med(人脑髓母细胞瘤细胞)5×106cells/瓶×2
戊糖杆菌 Lactobacillus pentosus
链轮枝菌 Streptoverticillium sp.
Western 中分子量蛋白marker20次国产
暂无 Penicillium sclerotigenum
漏斗状侧耳 Pleurotus sajor-caju
肾英文名称:A498
人绒毛膜毛细血管内皮细胞
香菇 Lentinula edodes
BABL/C小鼠胚胎细胞英文名称:BABL/C2
酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae青 G 盐溶液 ,200mg/mL 120697-1 1 Mu
5mL 抑氨肽酶,5mg/mL
1g 精胺
100mL 二甲基亚砜
100μL 即用型 GFP 标签蛋白裂解液
聚乙二醇 12000 CAS25322-68-3 250g
Protein A 琼脂糖 130418-1 1mL
5g 中性红
50 次 LAMP 扩增阳性对照
100mg 胶原酶Ⅱ型
20 次 细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-APC)
链亲和素 CAS9013-20-1 0.1mg
蛋白质电泳分子量标准 (3.3-20.1KD) 70102A-15 15 次
1mL 组织培养基蛋白酶抑制剂
100g 氯化
100mL 琼脂糖凝胶 2B
100 T 过氧化氢酶测试盒 ( 可见光比色法 )
磷脂酶 A2 CAS9001-84-7 1mg
玻璃匀浆器 ,2mL 101103B-1 1套
柱式真 RNAout 80804-50 50 次
100mL NP-40 裂解液