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产品型号：50微升
更新时间：2022-04-22
厂商性质：经销商
访问量：223
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DNA提取流程图：
下列是产品的订购信息!产品仅用于科研
中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 货号 |
细胞内钙离子荧光探针(Fura-2 AM) | Fura-2 pentakis ester | 50微升 | GOY-F10143 |
产品详细介绍：
本品是常用的检测细胞内钙离子浓度的荧光探针之一。 用于细胞内钙离子检测时，Fura-2 AM的常用浓度为0.5-5μM。通常用含有0.5-5μM的Fura-2 AM的适当溶液和细胞一起在4-37℃孵育15-60分钟，即可完成荧光探针的装载。 本Fura-2 AM(钙离子荧光探针)是配制于无水DMSO(anhydrous DMSO)中的储存液，浓度为2mM。 分子式：C44H47N3O24 分子量：1001.9 Fura-2 AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fura-2 AM的荧光比较弱，大激发波长为369nm，大发射波长为 478nm，并且其荧光不会随钙离子浓度改变而改变。Fura-2 AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fura-2，从而被滞留在细胞内。Fura-2可以和钙离子结合，结合钙离子后在330-350nm激发光下可以产生较强的荧光，而在380nm激发光下则会导致荧光减弱。这样就可以使用340nm和380nm这两个荧光的比值来检测细胞内的钙离子浓度，可以消除不同细胞样品间荧光探针装载效率的差异，荧光探针的渗漏，细胞厚度差异等一些误差因素。Fura-2和钙离子结合后，大激发波长为335nm(大激发波长随离子浓度的的不同而有所不同)，大发射波长为505nm。实际检测时推荐使用的激发波长为340nm，发射波长为510nm。如果做双波长检测，则推荐使用的激发波长为340nm和380nm。Fura-2的激发光谱参考下图，不同曲线表示不同钙离子浓度时的激发光谱。 Fura-2相对而言有较强的抗荧光淬灭能力，在荧光显微镜或其它荧光检测设备上可以连续检测1小时而不明显影响其荧光效果。 注意事项： 1. 本Fura-2 AM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。 2. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。 储存条件：-20℃，有效期6个月。 |
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c．细胞悬液 离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物*分离。
3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙，室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
兔血栓调节蛋白(rabbit TM) 作用： ELISA 规格： 48T/96T 进口分装 4-Chlorotestosterone acetate 中文名：醋酸氯 分子式：C21H29ClO3 度：98.0%
兔血栓素B2elisa试剂盒 兔血栓素B2试剂盒 规格型号：96T/48T 兔血栓素B2试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔血栓素B2试剂盒、兔血栓素B2 elisa试剂盒 保存条件：2-8℃ 保质期：6个月。 7-Acetoxy-4-methylcoumarin 中文名：7-乙酰氧基-4-甲基 分子式：C12H10O4 度：95.0%
兔血栓素B2(TXB2)ELISA试剂盒 5-Fluorouracil 51-21-8 中文名： 分子式：C4H3FN2O2 度：98.0% 关键词：
兔血栓素B2(TXB2)ELISAKit 4-Aminohippuric acid 61-78-9 中文名：4-氨基马尿酸 分子式：C9H10N2O3
兔血清总补体(CH50)ELISA试剂盒 5-Fluorouracil 51-21-8 中文名： 分子式：C4H3FN2O2
(分析标准品,>99.5%(GC)) Lauric acid 质量规格：分析标准品,>99.5%(GC) 英文名称RatHistamineELISAKit大鼠组胺(Histamine)规格：96T/48T
神经酸(分析标准品,≥99.0%(GC)) Nervonic acid 质量规格：分析标准品,≥99.0%(GC) 钙离子膜通道钙交换体(NCX/线粒体)功能荧光检测试剂盒20
十五烷酸(分析标准品,≥99.5%(GC)) Pentadecanoic Acid 质量规格：分析标准品,≥99.5%(GC) ELISAKitTI人真胰岛素规格：48T/96T
泛酸钙一水合物(标准品) (+)-Pantothenic acid calcium salt hydrate 质量规格：分析标准品 小鼠粒细胞趋化蛋白2(GCP2)ELISA试剂盒 ，英文名： GCP2 ELISA Kit
山梨酸钾(标准品) Potassium sorbate 质量规格：分析标准品 人补体片断4b(C4b)ELISA检测试剂盒HumanComplemefragme4b,C4bELISAKit 96T/48T
全氟辛酸(分析标准品, 用于环境分析) Pentadecafluorooctanoic acid 质量规格：分析标准品, 用于环境分析 大鼠血小板衍生生长因子AA(PDGF-AA)试剂盒 Rat Platelet-Derived Growth Factor AA,PDGF-AA ELISA kit
正辛酸(分析标准品,≥99.9%(GC)) n-Octanoic acid 质量规格：分析标准品,≥99.9%(GC) 英文名称RatHistamineELISAKit大鼠组胺(Histamine)规格：96T/48T
蓖麻油酸(分析标准品,99%) Ricinoleic acid 质量规格：分析标准品,99% 钙离子膜通道钙交换体(NCX/质膜)功能荧光检测试剂盒20
硬脂酸(分析标准品,≥99.5%(GC)) Stearic acid 质量规格：分析标准品,≥99.5%(GC) ELISAKitMEC/CCL28人粘膜相关上皮趋化因子规格：48T/96T
甜蜜素(标准品) Cyclamate 质量规格：分析标准品 小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF/CSF2)ELISA试剂盒 ，英文名： GMCSF/CSF2 ELISA Kit
细胞内钙离子荧光探针(Fura-2 AM)细胞BMK激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
组织BLK激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
细胞BLK激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
组织AX1激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
细胞AX1激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
实验步骤
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊(25:24:1)抽提两次,:异戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
