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更新时间:2025-04-08
厂商性质:经销商
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产品属性:
产品名称 | 物种 | 货号 |
透明质酸合酶1(HAS1)真核蛋白大鼠 | Rattus norvegicus (Rat,大鼠) | GOY-01D3027 |
英文名称:Eukaryotic Hyaluronan Synthase 1 (HAS1)
HuHAS1; HA synthase 1; Hyaluronate synthase 1; Hyaluronic acid synthase 1
型号:GOY-01D3027
酶与激酶
物种:Rattus norvegicus (Rat,大鼠)
来源:真核表达
宿主S. cerevisiae
内毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法测定)
亚细胞定位:n/a
预测分子量:67.8kDa
实际分子量:-(差异分析请参阅说明书)
片段与标签:Met1~Val583 (Accession # Q8CH93) with N-terminal His Tag
缓冲液成份:磷酸盐缓冲液(pH7.4,含有0.01%SKL, 1mM DTT, 5%Trehalose和Proclin300.)
性状:冻干粉
纯度:> 97%
等电点:-
应用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
规格:10μg、50μg、200μg、1mg、5mg
蛋白表达及纯化:
1.培养500ml哺乳动物细胞,然后将重组质粒转染到细胞中,通过瞬时表达产生目标蛋白。
2.收集含有目标蛋白的部分(细胞或培养上清)。
3.通过亲和,离子交换,疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。
4.通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。
5.通过Western-blot验证目标蛋白正确性。
交付内容:纯化好的目标蛋白及纯化报告。可按客户要求提供含纯化标签(Tag)或切除纯化标签(Tag)的最终蛋白,纯度最高可达90%以上。
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操作步骤:
Ⅰ 实体组织蛋白的提取
1、在每1mL冷Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制剂,1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。
2、每100mg固体组织置于培养皿中,剪碎成3mm×3mm左右的小块,加入0.5~1mL冷Lysis Buffer,玻璃匀浆器上下手动匀浆15次,注意低温操作;
3、取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管,离心10000转/分,4℃离心5min;
4、取上清转移至新的预冷的离心管中,即为全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);
5、分装保存于-70℃,避免反复冻融。
Ⅱ 培养细胞蛋白提取
1、贴壁培养的细胞,吸去培养基后,加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次,每次振摇数次以尽量去除培养液;
2、悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞,将细胞及培养液移至离心管中,1000转/分离心10min,再用10mL/150mm培养板的冷PBS,1000转/分离心5min洗两次;
3、在每1mL冷Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制剂,1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。
4、细胞洗涤后,转至新的预冷的离心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:
细胞数量 | Lysis Buffer加入量 |
107个 | 0.5mL~1mL |
5×106个 | 0.2mL~0.5mL |
5、置于4℃摇床平台上,温和振荡15 min;
6、14,000rpm,4℃离心15min,取上清为全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);
7、分装保存于-70℃,避免反复冻融。
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