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基质金属蛋白酶13(MMP13)真核蛋白大鼠
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基质金属蛋白酶13(MMP13)真核蛋白大鼠公司正在出售的产品:牛磺酸/β-氨基乙磺酸抗体 英文名称:Gibberellins 0.1ml赤抗体 英文名称:Gibberellins 0.1mlGRAM结构域蛋白2抗体 英文名称:GRAMD2 0.2ml

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更新时间:2023-03-22

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基质金属蛋白酶13(MMP13)真核蛋白大鼠

Rattus norvegicus (Rat,大鼠)

GOY-01D3034

 

 

英文名称:Eukaryotic Matrix Metalloproteinase 13 (MMP13)

CLG3; Collagenase 3

型号:GOY-01D3034

酶与激酶

肿瘤免疫

骨骼代谢

风湿病学

物种:Rattus norvegicus (Rat,大鼠)

来源:真核表达

宿主293F cell

内毒素水平:<1.0EU per 1ug (determined by the LAL method)

亚细胞定位::分泌, 细胞外基质

预测分子量:53.4kDa

实际分子量:60kDa(差异分析请参阅说明书)

片段与标签:Leu14~Cys466 with N-terminal His Tag

缓冲液成份:20mM Tris, 150mM NaCl缓冲液,(pH8.0,含有1mM EDTA, 1mM DTT, 5% Trehalose and Proclin300)

性状:冻干粉

纯度:> 97%

等电点:5.1

应用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

规格10μg50μg200μg1mg5mg

图片3.png
蛋白表达及纯化:

1.培养500ml哺乳动物细胞,然后将重组质粒转染到细胞中,通过瞬时表达产生目标蛋白。

2.收集含有目标蛋白的部分(细胞或培养上清)。

3.通过亲和,离子交换,疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。

4.通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。

5.通过Western-blot验证目标蛋白正确性。

交付内容:纯化好的目标蛋白及纯化报告。可按客户要求提供含纯化标签(Tag)或切除纯化标签(Tag)的最终蛋白,纯度最高可达90%以上。
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操作步骤:

Ⅰ 实体组织蛋白的提取

1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制剂, 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。

2.  每100mg固体组织置于培养皿中,剪碎成3mm×3mm左右的小块,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃匀浆器上下手动匀浆15次,注意低温操作;

3. 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管,离心10000转/分,4℃离心5 min;

4. 取上清转移至新的预冷的离心管中,即为全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);

5. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。

Ⅱ 培养细胞蛋白提取

1. 贴壁培养的细胞,吸去培养基后,加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次,每次振摇数次以尽量去除培养液;

2. 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞,将细胞及培养液移至离心管中, 1000转/分离心10 min,再用10mL/150mm培养板的冷PBS,1000转/分离心5 min洗两次;

3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制剂, 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。

4. 细胞洗涤后,转至新的预冷的离心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:

 

细胞数量

Lysis Buffer加入量

107个

0.5 mL~1 mL

5×106个

0.2 mL~0.5 mL

 

 

5.置于4℃摇床平台上,温和振荡15 min;

6. 14,000rpm,4℃离心15min,取上清为全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法);

7. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。

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