【实验用品】材料：贴壁培养的ATCC细胞器材：离心机、显微镜、血细胞计数板试剂：Hanks液、0．25％胰蛋白酶、含10％小牛血清／胎牛血清的DMEM培养基(根据实验需要也可以是其他种类的培养基)【实验步骤】(1)用胰蛋白酶消化处于对数生长期的单层培养细胞，细胞置于10ml离心管中，1000r／min离心5min，弃上清。(2)加入含血清的DMEM培养基，制备单细胞悬液。(3)吹打均匀后，对ATCC细胞进行计数。(4)按2x104～5x104／ml的密度将细胞接种到24孔细胞...

ATCC细胞实验用品材料：贴壁培养的细胞器材：24孔培养孔板、吸管、胶帽、离心管、培养皿、半对数坐标纸、盖玻片、细胞计数板、酒精棉球、酒精灯、离心机、倒置显微镜、普通光学显微镜、超净工作台、CO2培养箱试剂：Hanks液、DMEM培养基(含10％小牛血清)、0.25％胰蛋白酶消化液、吉姆萨染液实验步骤(1)消化：用0．25％胰蛋白酶溶液消化处于对数生长期的单层培养细胞，收集消化的细胞于10ml离心管中。(2)离心：500～1000r／min离心5min，弃上清。(3)加入DM...

1、肿瘤细胞培养基的新鲜程度：一般加入血清后的*培养基，2周内用完。否则血清有效成分失活，影响细胞培养。建议：*培养基一次不要配太多，200ml以下。或根据用量决定。2、细胞外源微生物的污染：细胞不宜长期体外培养，因为外源微生物污染的几率大大提高。易发现和难发现的。影响细胞状态。建议：实验前冻存一批细胞，隔几个月重新复苏。即保证实验所用细胞代数一致，又将外源污染的后果降到zui低。3、排除其他原因：如更换培养条件（血清、培养基等）；肿瘤细胞使用器皿的洁净程度；人表皮黑色素细胞...

1．血管内皮细胞重要标志（1）转化细胞第Ⅷ因子关连抗原，可以由全身所有血管内皮细胞产生，检测这一因子主要用相应抗体。VWF有其特异性，人的VWF抗体对牛的内皮细胞没有交叉反应。兔疫荧光间接法测定该因子，阳性细胞出现细长的荧光颗粒，在核周围的颗粒较密，细胞边缘颗粒较少。（2）Weibel-Palade小体，该小体是血管内皮细胞又一特异性的标志。电子显微镜下，呈现0.1～0.3μm,长0.5～5μm的椭圆形棒状结构。上述的VWF就是该小体产生的。2．培养的大动脉内皮细胞形态培养的...

ATCC细胞一般常规检查用肉眼即可观察，主要看培养液的颜色和透明度的变化。培养细胞的观察检测方法大多数细胞适于在pH7.2～7.4条件下生长，低于pH6.8或高于pH7.6对细胞有害，甚至造成细胞退化或死亡。细胞对碱性不如对酸性的变化耐受，偏酸的条件比偏碱的环境对细胞生长有利。随细胞数量的增多、代谢加强，释放CO2增多，使pH降低。为了维持培养基恒定的pH，多在培养基中加入磷酸盐等缓冲剂。对细胞无毒性，也不起缓冲作用，主要作用是防止pH迅速变动，在开瓶通气培养或活细胞观察时能...

ATCC细胞常见的转染方法有：1.磷酸钙法：该方法利用磷酸钙DNA复合物吸附细胞膜被细胞内吞原理得到瞬时或稳定转染结果，操作简便但重复性差，不可用于原代细胞的转染。2.DEAE-右旋糖苷法：带正电的DEAE-右旋糖苷与核酸带负电的磷酸骨架相互作用形成的复合物被细胞内吞，可用于瞬时转染，方法相对简便、结果可重复但对细胞有一定的毒副作用。3.电穿孔法：利用高脉冲电压破坏细胞膜电位，DNA通过膜上形成的小孔导入。稳定转染，瞬时转染均适用。适用性广但细胞致死率高，DNA和细胞用量大，...

1.肿瘤细胞实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminarflow)以紫外灯照射30-60分钟灭菌，以70%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70%ethanol擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。2.无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、...

一、CO2培养箱CO2培养箱是转化细胞培养的*仪器，它为细胞提供了一个体外培养的舒适环境，如适宜的温度、湿度、酸碱度、O2浓度等。细胞在体外培养时很容易受到各种细菌、微生物的感染，因此，CO2培养箱的灭菌和抑菌能力就显得尤为重要。二、纯水系统细胞培养用水一般要求双蒸水(0.8MΩ以上)，实际上普通蒸馏水经玻璃器皿中按标准方法蒸馏二次得到的双蒸水是不能满足要求的，而且水中的内毒素直接参与细胞凋亡，血清中内毒素含量越低，对细胞毒性越小，越利于细胞的生长和传代;内毒素含量过高，会直...

肿瘤细胞培养时注意事项1.玻璃吸管和玻璃培养瓶的消毒:1)高压蒸汽灭菌15分钟以上;2)干烤消毒140度2小时以上;2.无菌工作台先清洗后用75%酒精擦拭干净，紫外线照射40分钟以上;各种培养板照射3小时以上;3.培养基(pH7.2)和血清配制好后要做无菌试验:将血清按10%加入培养基内，用无菌的玻璃离心管或玻璃瓶取*培养基5-10ml置培养箱内培养2-3天，肉眼见无浑浊或沉淀等异物。分装后置4度保存;4.消化液(pH7.8)或其它加入液，应用高压蒸汽灭菌或一次性无菌滤器过滤...

一、培养ATCC细胞不贴壁可能原因：胰蛋白酶消化过度支原体污染培养基pH值过碱（NaHCO3分解）细胞老化接种细胞起始浓度太低或太高解决方法：缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度分离培养物，检测支原体。清洁支架或培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2启用新的保种细胞调节*接种细胞浓度二、悬浮细胞成簇可能原因：培养液中含钙、镁离子；支原体污染；蛋白酶过度消化使得细胞裂解；DNA污染解决方法：用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞，轻巧吹吸细胞获得...

一、干细胞平衡盐溶液(balancedsaltsolution,BSS):主要是由无机盐、葡萄糖组成，它的作用是维持细胞渗透压平衡，保持pH稳定及提供简单的营养。主要用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等。zui简单的BSS是Ringer。D-Hank"s与Hank"s的一个主要区别是前者不含有Ca2+、Mg2+，因此D-Hank"s常用于配制胰酶溶液。Earle平衡液含有较高的NaHCO3(2.2g/L),适合于5%CO2的培养条件，Hank"s平衡液仅含有0....

1.ATCC细胞实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminarflow)以紫外灯照射30-60分钟灭菌，以70%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70%ethanol擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。2.无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管...