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更新时间:2017-01-07
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人前列腺癌低转移细胞株;PC-3M-2B4图片【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗。
细胞名称 人前列腺癌低转移细胞株;PC-3M-2B4图片
形态特性 上皮样;多角
生长特性 贴壁生长
特征特性 母系PC-3M,单细胞克隆法分离鉴定的低转移亚系;裸鼠体内成瘤率87.5%,不转移。
培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
传代方法 1:3~1:6传代;2~3天1次。
传代情况 C3
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:11;D13S317:11;D16S539:11,12;D18S51:14,15;D19S433:14;D21S11:29,31.2;D2S1338:18,20;D3S1358:16,20;D5S818:13;D7S820:8,11;D8S1179:13;FGA:24,25;TH01:6,7;TPOX:8,9;vWA:17;
同工酶
染色体
使用权限 A类
细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L),90%;优质胎牛血清,10%。
2、培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二、细胞处理:
1、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养)。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1)弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。 细胞到达客户手中,1个月内出现任何问题,导致细胞在冻存前死亡,我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤:
1)贴壁细胞传代:提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内,吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量PBS润洗细胞,加入适量胰酶,使胰酶的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止胰酶作用,用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量的气泡,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养,隔天观察贴壁生长情况。
2)悬浮细胞传代:将细胞悬液转移到无菌离心管内,1000rpm离心5min,弃去上清,加入新鲜的培养基,用吸管小心吹散沉淀,制成细胞悬液,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养。
130868-1二硫键异构酶,人1mg
130815-250Taq 酶抗体250U
土霉素盐酸盐溶液 ,100mg/mL10mL
F12K 液体培养基 ( 无血清和双抗 )500mL
N,N- 双 (2- 羟乙基 )-3- 氨基乙磺酸5g
MgSO4溶液,10mM,PCR 5mL
CAS59-05-2氨甲喋呤10mg
131131B-100真细菌种属鉴定 PCR Mix 2100 次
细菌 RNAout250 次
庚烷磺酸1g
1,4- 双 (5- 苯基 -2- 噁唑基 ) 苯1g
柱式病毒 RNA-DNA 双提试剂盒50 次
CAS39455-31-7DEAE 葡聚糖凝胶 A-5025g
12-242K802 菌种1mL
盐酸胍溶液,8M200mL
Indo-1 AM1mg
胸嘧啶核苷5gTABERSONINE它勃4429-63-4
10 G METHYL JASMONATEPURE茉莉酸酯39924-52-2
Monoethyl Adipate己二酸单乙酯626-86-8
Dibutyltin maleate二丁基马来酸锡1978/4/6
DIFORMYLIMIDE SODIUM SALT二酰氨基18197-26-7
5-Bromo-2-fluorobenzonitrile5-溴-2-179897-89-3
Potassium methoxide醇钾865-33-8
DL-HomoserineDL-高丝氨酸1927-25-9
2-Fluoro-4-nitrotoluene2--4-基1427-07-2
4-NITROPHENYL-N-ACETYL-BETA-D-GLUCOSAMINIDE4-基基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷3459-18-5
SINIGRIN MONOHYDRATE介子苷64550-88-5
beta-Diphosphopyridine nucleotide烟酰胺腺嘌呤双核苷酸53-84-9
Cyclobutylamine环丁基胺2516-34-9
NAtris 乙酸
1-Boc-4-(aminomethyl)piperidine4-氨基基-1-Boc-啶144222-22-0
(5E,9E)-6,10,14-Trimethylpentadeca-5,9,13-trien-2-one法尼基丙1117-52-8
2-Bromo-2-methylpropionic acid2-溴代异丁酸2052/1/9
N-AcetylethylenediamineN-乙酰基乙1001-53-2
Twofold Lactose Bile Salt Broth双料乳糖胆胨水
CALCIUM PYROPHOSPHATE焦磷酸钙7790-76-3
CHLOROXURON枯草隆1982-47-4
Abscisic acid脱落酸14375-45-2
CHLOROFORM-D氘代仿-d865-49-6
生物素化的 β- 半乳糖苷酶100U
CAS9025-56-3半纤维素酶15ku
100838-100遗传霉素 (G418) 干粉100mg