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更新时间:2017-01-07
厂商性质:经销商
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人子宫内膜低分化腺癌细胞;EAG3图片【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗。
细胞名称 人子宫内膜低分化腺癌细胞;EAG3图片
形态特性 上皮样;多角形
生长特性 贴壁生长
特征特性
培养条件 DMEM/F12(1:1): Ham's F12/DME Medium (DME H-16/F-12 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium) 10%FBS
传代方法 1:2传代,3天传代一次
传代情况 P21
冻存条件 基础培养基+8%DMSO+36%FBS
支原体检测 培养法(-)
STR
同工酶
染色体
使用权限 A类
细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L),90%;优质胎牛血清,10%。
2、培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二、细胞处理:
1、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养)。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1)弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。 细胞到达客户手中,1个月内出现任何问题,导致细胞在冻存前死亡,我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤:
1)贴壁细胞传代:提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内,吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量PBS润洗细胞,加入适量胰酶,使胰酶的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止胰酶作用,用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量的气泡,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养,隔天观察贴壁生长情况。
2)悬浮细胞传代:将细胞悬液转移到无菌离心管内,1000rpm离心5min,弃去上清,加入新鲜的培养基,用吸管小心吹散沉淀,制成细胞悬液,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养。
角质细胞生长因子 - 不含 BPE5mL
L- 甲硫氨酸25g
ECL 法生物素杂交检测试剂盒5次
CAS3150-24-1对硝基苯 -β-D- 吡喃半乳糖苷1g
130584-1000小鼠抗 T7 标签单抗1000μL
植物种属鉴定 PCR Mix 1100 次
L- 苹果酸25g
苏丹Ⅲ5g
超敏化学发光(HRP)检测试剂盒 2.0 50mL
CAS112926-00-8变色硅胶50g
100909-200长效期 SDS-PAGE 配胶液200mL
柱式质粒 DNAout50 次
鲁米诺1g
梭菌蛋白酶10μg
H5N1 神经氨酸酶抑制剂鉴定试剂盒100 次 Anthraquinone蒽醌84-65-1
Propyl 4-hydroxy-3-iodobenzoate4-羟基-3-碘酸丙酯15126-08-6
1-Indanone1-茚83-33-0
Nalpha-Fmoc-L-tyrosineFmoc-L-酪氨酸92954-90-0
Methyl 2,5-dihydroxybenzoate2,5-二羟基酸酯2150-46-1
5-METHOXY-2-METHYLINDOLE5-氧基-2-基吲哚1076-74-0
Tetracaine丁卡因94-24-6
3-Cyanobenzoic acid3-基酸1877-72-1
DL-Arginine hydrochloride monohydrateDL-精氨酸酸(一水)32042-43-6
4-Nitrophenyl isocyanate异酸对基100-28-7
Vinyltrimethoxysilane乙基三氧基硅烷2768/2/7
NA(R)-2-四氢萘胺
FRAXINELLONE梣28808-62-0
MONALIDE庚酰草胺7287-36-7
lurium tetrachloride四化碲10026-07-0
FMOC-CYS(ACM)-WANG RESINFMOC-CYS(ACM)-WANG RESIN
3-Methylphenethyl alcohol3-基乙醇1875-89-4
Harpagoside哈巴俄苷19210-12-9
Ethyl (trimethylsilyl)acetate三基硅乙酸乙酯4071-88-9
3,4',5-TRIMETHOXY-TRANS-STILBENE白藜芦醇三22255-22-7
Dibenzothiophene二并噻吩132-65-0
4-Fluorophenethyl alcohol对乙醇7589-27-7
CAS9001-12-1胶原酶Ⅰ型100mg
131150-100山羊抗小鼠 IgG(H+L),辣根过氧化物酶标记100μL
80929-250液体样品 RNAout250 次
N- 三 ( 羟甲基 ) 甲基 -2- 氨基乙烷磺酸5g
4mL DNA 离心超滤管 (150-250 KD)1个
前脂肪细胞生长因子5mL