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更新时间:2017-01-11
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人肺鳞癌细胞;SK-MES-1图片【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗。
细胞名称 人肺鳞癌细胞;SK-MES-1图片
形态特性 上皮细胞样
生长特性 贴壁生长
特征特性 该细胞源于一位65岁的白种男人,分离自由肺癌转移到的胸膜积液中。
培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
传代方法 1:3传代,2-3天传一代
传代情况 PN5
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR
同工酶
染色体
使用权限 A类
细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L),90%;优质胎牛血清,10%。
2、培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二、细胞处理:
1、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养)。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1)弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。 细胞到达客户手中,1个月内出现任何问题,导致细胞在冻存前死亡,我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤:
1)贴壁细胞传代:提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内,吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量PBS润洗细胞,加入适量胰酶,使胰酶的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止胰酶作用,用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量的气泡,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养,隔天观察贴壁生长情况。
2)悬浮细胞传代:将细胞悬液转移到无菌离心管内,1000rpm离心5min,弃去上清,加入新鲜的培养基,用吸管小心吹散沉淀,制成细胞悬液,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养。
链亲和素0.1mg
SalI1000U
CAS9024-52-6醛缩酶100mg
140592-1000PCNA 小鼠单抗1000 μL
80601-250非冻型细菌 RNA 保存液250mL
免 RNA 提取 RT-PCR 试剂盒 100 次
3-( 环己胺 )-1- 丙磺酸10g
间充质干细胞生长因子5mL
胰蛋白酶抑制剂,10mg/mL10mL
21-0160-5 角膜上皮细胞生长因子5mL
60401-250RNase-free 75% 乙醇250mL
PCR Mix 染料10mL
氨基磁珠2mL
大提柱式土壤 DNAout4次
Afu 尿嘧啶 -DNA 糖基化酶200U
CAS6131-99-3二甲基酸5g
70602-100DNA 快速连接试剂盒100 次
一站式 MBP 标签蛋白纯化套装20 次
克必隆 eTS 细菌基因组差减杂交试剂盒7次
卵清蛋白 10g
成纤维细胞生长因子5mL
DNA EDTA 2Na100g
140628-20双染细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V- 荧光素 488·PI) 20 次
120654A-20 Southern DNA Marker( 生物素 )20 次
石蜡包埋组织 DNAout30 次
动物 RNAout(TRIzol) 100mL人类白C抗原DR(HLA-DR)ELISA试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
人抗心磷脂抗体IgM(ACA-IgM)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
人抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-Ab)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
人巨噬细胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
人基质细胞衍生因子1(SDF-1)ELISA试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
人过氧化氢酶(CAT)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
人干扰素α2a(IFN-α2a)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
人凋亡相关因子配体(FASL)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
人促黄体激素(LH)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
人表皮角蛋白(EK)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
人白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
人α突触核蛋白(α-SYN)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
人FMS样酪氨酸激酶3(Flt3)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
人2,3Dinor血栓烷B2(2,3-dinor-TXB2)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
犬肾上腺髓质素(ADM)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
牛磷酸果糖激酶(PFK)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
鸡瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
鸡白介素4(IL-4)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
鹅褪黑素(MT/MLT)ELISA试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
大鼠载脂蛋白A(apo-A)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
大鼠血管生长素(ANG)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
大鼠天门冬氨酸氨基转移酶(AST)ELISA试剂盒96T\48T试剂盒组装/原装
大鼠热休克蛋白27(HSP-27)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装