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更新时间:2017-01-11
厂商性质:经销商
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甲磺酸伊马替尼耐药的胃肠道间质瘤细胞系;GIST-1114图片【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗。
细胞名称 甲磺酸伊马替尼耐药的胃肠道间质瘤细胞系;GIST-1114图片
形态特性 上皮样
生长特性 贴壁生长
特征特性 该细胞属专利保藏,其特征特性尚未公开。
培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
传代方法 1:3传代,3-4天传1次
传代情况 C5
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR
同工酶
染色体
使用权限 未定
细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L),90%;优质胎牛血清,10%。
2、培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二、细胞处理:
1、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养)。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1)弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。 细胞到达客户手中,1个月内出现任何问题,导致细胞在冻存前死亡,我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤:
1)贴壁细胞传代:提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内,吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量PBS润洗细胞,加入适量胰酶,使胰酶的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止胰酶作用,用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量的气泡,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养,隔天观察贴壁生长情况。
2)悬浮细胞传代:将细胞悬液转移到无菌离心管内,1000rpm离心5min,弃去上清,加入新鲜的培养基,用吸管小心吹散沉淀,制成细胞悬液,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养。
DNA Tris Base( 三羟甲基氨基甲烷 )100g
柱式真菌 RNAout50 次
柱式海洋动物 DNAout50 次
120312-500末端脱氧核苷转移酶 (TdT)500U
90603B-5随机引物法 DNA 探针生物素标记试剂盒5次
T4 噬菌体基因 32 蛋白500μg
蛋白质电泳分子量标准 (3.3-20.1KD)15 次
离心管 ( 配研磨杵用 ) 50 只
小鼠抗 VSV-G 标签单抗100μL
120708-1000凝血酶1000U
131141-100dNTP 和引物清除剂100 次
透明质酸酶100mg
F12 培养基 ( 含 10% 胎牛血清 )100mL
肌球蛋白100mg大鼠白三烯B5(LTB5)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
大鼠N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
鹅血管活性肠肽(VIP)ELISA试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
猪血纤蛋白原降解产物(FDP)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
猪黄嘌呤氧化酶(XOD)ELISA试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
植物维生素D(VD)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
小鼠组胺(HIS)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
小鼠叶酸(FA)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
小鼠细胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
小鼠嗜酸粒细胞趋化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
小鼠凝血因子Ⅸ(FⅨ)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
小鼠抗中性粒细胞核周抗体(pANCA)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
小鼠基质裂解素(ST2)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
小鼠肝脂酶(HL)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
小鼠补体因子H(CFH)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
小鼠β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
小鼠17-酮类固醇(17-KS)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
兔子髓磷脂碱性蛋白(MBP)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
Red-Tth DNA 聚合酶250U
CAS130-22-3茜素红 S25g
131130F-100真菌种属鉴定 PCR Mix 6100 次
细菌 DNAout250 次
高载量 PCR 片段纯化试剂盒100 次
D- 棉子糖10g