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【友情提示】：本产品仅供科研研究使用，不得用于人体临床直接检测。避免给您带来不必要的损失，请仔细阅读购买说明！
产品名称：肉桂酸4羟化酶（C4H）微量法测试盒
规格 : 100管/96样
测试方法: 微量法
货号：GOY-01S6948
分类：其它系列
商品介绍：
C4H又称反式肉桂酸-4-单氧化酶，多存在于高等植物、酵母、菌类中，该酶催化肉桂酸羟化作用产生4-香豆酸盐，是苯丙烷途径中继L-苯丙氨酸解氨酶之后的第二个关键酶。

测定原理：

C4H催化肉桂酸和NADP生成4-香豆酸盐和NADPH，在340nm下测定NADPH生成速率，即可反映C4H活性。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
提取液一：液体50mL×1瓶，4℃保存。
提取液二：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入40mL试剂四充分溶解待用，用不完的试剂4℃保存；
试剂二：液体18μL×1瓶，4℃保存；临用前加入2.5mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂4℃保存；
试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入2.5mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂4℃保存；
试剂四：液体50mL×1瓶， 4℃保存；
测定步骤
1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、 将试剂一、二、三37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热10分钟。
3、 加样表：

样本的前处理
①总FBP酶提取：建议称取约0.1g样本，加入1mL提取液一，冰浴匀浆后超声破碎（冰浴，200W，破碎3s，间歇7s，总时间1min），然后4℃，8000g离心10min，取上清测定。
②胞浆和叶绿体FBP酶的分离：按照植物组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5～10的比例（建议称取约0.1g样本，加入1mL提取液一），冰浴匀浆后于4℃，200g离心5min，弃沉淀，取上清在4℃，8000g离心10min，取上清用于测定胞浆FBP酶活性，取沉淀加1mL提取液二，震荡溶解后超声破碎（冰浴，200W，破碎3s，间歇7s，总时间1min），然后4℃，8000g离心10min，取上清测定叶绿体中FBP酶活性。
建议测定总FBP酶活性，按照步骤①提取粗酶液，若需要分别测定胞浆和叶绿体中的FBP，则按照步骤②提取粗酶液。
型乙酰胆碱受体α6/AChRα6抗体     丝氨酸/苏氨酸激酶TLK2抗体

型乙酰胆碱受体α9/AChRα9抗体     丝氨酸/苏氨酸激酶p90RSK蛋白抗体

型乙酰胆碱受体δ/AChRδ抗体     丝氨酸/苏氨酸激酶36融合同源蛋白抗体

嗜铬粒蛋白C抗体     丝氨酸/苏氨酸蛋白0酸酶4C抗体

卡因和调节转录蛋白抗体     丝氨酸/苏氨酸蛋白0酸酶1调节亚基10抗体
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肉桂酸4羟化酶（C4H）微量法测试盒dCTP 溶液，2.5mM2mL  钙蛋白酶抑制剂Ⅰ溶液，10mg/mL10mL

dCTP 溶液，100mM0.5mL  改良 Lowry 法蛋白定量试剂盒1000 次

Deaza dGTP0.4mL  福林酚试剂100mL

双脱氧 dNTP 套装40uL×4  粪便 DNAout30 次

dNTP 和引物清除剂100 次  粪便 DNAout100 次
FBP活性计算：
（1）按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
FBP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位的定义：每g组织每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
FBP（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W ×V样÷V样总) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反总：反应体系总体积，1×10-3 L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.1 mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。