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产品属性：

组织来源：牙髓组织

产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶

细胞简介：

人牙髓干细胞分离自滑膜组织；牙髓组织位于牙齿内部的牙髓腔内。牙髓腔的外形与牙体形态大致相似，牙冠部髓腔较大，称髓室，牙根部髓腔较细小，称根管，根尖部有小孔，称根尖孔。牙髓组织主要包含神经、血管，淋巴和结缔组织，还有排列在牙髓外周的造牙本质细胞，其作用是造牙本质。牙髓因受到病源刺激物的作用不同以及机体抵抗力的差异，出现不同的病理变化，在临床上会表现为一系列不同的症状和体征。牙髓充血状况持续时间较长后，转化为急性牙髓炎症。间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）来源于胚胎时期的中胚层组织，具有很强的自我复制和多向分化潜能，具有向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞及肌细胞等多种终末细胞定向分化的能力，运用 MSCs来修复软骨损伤具有很好的应用前景，目前已能够从骨髓、脂肪、滑膜、骨骼、肌肉等组织以及羊水、脐带、脐带血中分离和制备间充质干细胞。

方法简介：

公司实验室分离的采用胶原酶消化法、低密度稀释克隆制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的经CD90免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传3-5代左右

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

冷冻保存细胞之方法？

冷冻保存方法一：冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30分钟*） → -80 ℃16~18小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase长期储存。

冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。-20 ℃不可超过1小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

培养操作：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml ，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2. 4min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。

3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

实验报告：

产品仅用于科研：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，后将成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4mL酶消化液（0.1%和0.1%I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10�S培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养。
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4%BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗，37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
血管紧张素Ⅱ抗体

血管紧张素Ⅱ受体1抗体

血管生成素-1抗体

血管生成素样蛋白2抗体

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