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更新时间:2017-01-07
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人乳腺导管癌细胞;T47D 图片【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗。
细胞名称 人乳腺导管癌细胞;T47D 图片
形态特性 上皮样
生长特性 贴壁生长
特征特性 T-47由I Keydar分离自一位54岁乳房侵入性导管癌的女性患者的胸腔积液;分化的上皮亚株(T-47D)有细胞质连接和17β雌二醇及其他类固醇激素、降钙素的受体;表达WNT7B癌基因。
培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS;0.2 Units/ml牛胰岛素
传代方法 1:3~1:5传代,每周换液2~3次。
传代情况 P99
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:11,13;D13S317:12;D16S539:10;D18S51:17;D19S433:14;D21S11:28,31;D2S1338:24;D3S1358:15,17;D5S818:12;D7S820:11;D8S1179:13;FGA:23;TH01:6;TPOX:11;vWA:14;
同工酶
染色体 56~65
使用权限 A类
细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L),90%;优质胎牛血清,10%。
2、培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二、细胞处理:
1、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养)。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1)弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。 细胞到达客户手中,1个月内出现任何问题,导致细胞在冻存前死亡,我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤:
1)贴壁细胞传代:提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内,吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量PBS润洗细胞,加入适量胰酶,使胰酶的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止胰酶作用,用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量的气泡,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养,隔天观察贴壁生长情况。
2)悬浮细胞传代:将细胞悬液转移到无菌离心管内,1000rpm离心5min,弃去上清,加入新鲜的培养基,用吸管小心吹散沉淀,制成细胞悬液,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养。
WB600 枯草宿主菌菌种1mL
131035-30人培养细胞基因组 DNA30μg
130960-100超螺旋 DNA 分子量标准100uL
双染细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V- 荧光素 488·PI) 50 次
HRP 标记的抗生物素抗体10μL
叶酸5g
弗氏不*佐剂10mL
CAS114162-64-05- 溴 -4- 氯 -3- 吲哚葡萄糖苷5mg
21-0090-5 色素细胞生长因子 - 不含 TPA5mL
60501-20一管式拭子 DNAout20 次
RecJf 核酸外切酶1000U
Deaza dGTP0.4mL
96 孔板病毒 RNAout( 离心法 )5次
T4 核酸内切酶 V2000U
CAS633-03-4亮绿5g
12-216SMD1163 酵母菌种1mL
一站式 CTAB-PAGE 电泳套装30 次
克必隆 eTS miRNA RT-PCR 试剂盒10 次FORSYTHOSIDE A连翘脂苷 A79916-77-1
3-Hydroxy-2,4,6-tribromobenzoic acid2,4,6-三溴-3-羟基酸14348-40-4
TERT-BUTYL ETHYL ETHER叔丁基637-92-3
3-Bromothiophene3-溴噻吩872-31-1
Calix[4]arene杯[4]芳烃74568-07-3
Genistin染料木苷529-59-9
cis-3-Hexenyl lactate顺式-3-己醇乳酸酯61931-81-5
1-Butyl-3-methylimidazolium tetrafluoroborate1-丁基-3-基咪唑四酸174501-65-6
Decylbromide溴代正癸烷112-29-8
NA芽孢染色液
(2R,3R)-2-Amino-3-methylpentanoic acidD-异亮氨酸319-78-8
ALLYLPHOSPHONIC DICHLORIDE二化丙基膦1498-47-1
Trifluoro(methanol)boron三化醇373-57-9
Sodium acetate乙酸127-09-3
Potassium permanganate高锰酸钾7722-64-7
p-Toluic acid对酸99-94-5
2-ACETAMIDOFLUORENEN-(2-芴基)乙酰胺53-96-3
4-Butylphenol4-丁基酚1638-22-8
5-Amino-2-methylpyridine5-氨基-2-基吡啶3430-14-6
吐温 -20100mL
McCoy's5A 培养基 ( 含 1% 双抗 +10% 小牛血清 )500mL