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更新时间:2017-01-07
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人宫颈癌细胞;H1HeLa图片【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗。
细胞名称 人宫颈癌细胞;H1HeLa图片
形态特性 上皮细胞样
生长特性 贴壁生长
特征特性 该细胞由V. Hamparian从HeLa细胞建立,对鼻病毒敏感,用于鼻病毒的传代及滴定。
培养条件 L15: Leibovitz Medium 10%FBS
传代方法 1:4~1:10传代,每周换液2~3次
传代情况 P19
冻存条件 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:9,10;D13S317:12,13.3;D16S539:9,10;D18S51:16;D19S433:13,14;D21S11:27,28;D2S1338:17;D3S1358:15,18;D5S818:11,12;D7S820:8,12;D8S1179:12,13;FGA:18,21;TH01:7;TPOX:8,12;vWA:16,18;
同工酶
染色体
使用权限 A类
细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L),90%;优质胎牛血清,10%。
2、培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二、细胞处理:
1、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养)。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1)弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。 细胞到达客户手中,1个月内出现任何问题,导致细胞在冻存前死亡,我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤:
1)贴壁细胞传代:提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内,吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量PBS润洗细胞,加入适量胰酶,使胰酶的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止胰酶作用,用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量的气泡,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养,隔天观察贴壁生长情况。
2)悬浮细胞传代:将细胞悬液转移到无菌离心管内,1000rpm离心5min,弃去上清,加入新鲜的培养基,用吸管小心吹散沉淀,制成细胞悬液,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养。
硝酸纤维素膜,13×20cm1张
固相内毒素清除剂100g
聚乙二醇 20000250g
柱式酵母 DNAout50 次
CAS20325-40-0邻联茴香胺1g
12-252Stb12 菌种1mL
一步法96 孔板单菌落质粒DNAout( 真空法)1次
肌苷5g
硫柳汞25g
考马斯亮蓝 R-25010g
CAS31282-04-9潮霉素 B1g
120703-10盐酸万古霉素溶液 ,50mg/mL10mL
荧光法死细胞检测试剂盒1000 次
聚乙烯吡咯烷酮 K360100g
青霉素 G 盐1g
DAB 法生物素杂交试剂盒5次
CAS26305-03-3胃蛋白酶抑制剂5mg
131074-50SDS-PAGE 样品制备试剂盒50 次
周细胞生长因子5mL
L-Glutathione (reduced form)( 抗氧化剂 )1g
丙酮酸激酶2mg
双染细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V- 荧光素 647·7-AAD)50 次
CAS504-17-6β- 硫代巴比妥酸5g
100810-1000超快蛋白银染试剂盒1000mL
α-Actin 小鼠单抗30μL
氯霉素溶液 ,25mg/mL10mL(1S,2S,6S,9R)-9-hydroxy-9-(hydroxymethyl)-2-[(2S,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3-oxabicyclo[4.3.0]nona-4,7-diene-5-carboxylic acid水晶兰苷5945-50-6
Fluorescamine荧光胺38183-12-9
NA二硫化碳中系物混合标样
Tetrabutylphosphonium bromide四丁基溴化磷3115-68-2
1-ISOPROPYL-4-NITROBENZENE对基异丙基1817-47-6
Mogroside V罗汉果糖苷 V88901-36-4
Lilolidine5,6-二氢-4H-吡咯并[3,2,1-IJ]喹啉5840/1/7
Bis(2,4-pentanediono)nickel乙酰丙镍3264-82-2
2-Bromo-5-methylthiophene2-溴-5-基噻吩765-58-2
Chlorpheniramine maleate马来酸那敏113-92-8
(1E,6E)-1-(4-hydroxy-3-methoxy-phenyl)-7-(4-hydroxyphenyl)hepta-1,6-di ene-3,5-dione去氧基姜黄素33171-16-3
TRIS(4-CHLOROPHENYL)PHOSPHINE三(4-基)膦1159-54-2
KAOLIN高岭土1332-58-7
1-Bromo-4-tert-butylbenzene4-叔丁基溴3972-65-4
Lithium hexafluorophosphate六磷酸锂21324-40-3
Ethyl gallate没食子酸乙酯831-61-8
2-Hydroxypyrimidine hydrochloride2-羟基嘧啶酸38353-09-2
Indium chloride化铟10025-82-8