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Cas9稳定表达的人前列腺癌细胞；DU145-Cas9-539图片【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。
细胞名称 Cas9稳定表达的人前列腺癌细胞；DU145-Cas9-539图片
形态特性  上皮样
生长特性 贴壁生长
特征特性  该细胞是采用慢病毒感染的方式使Du145细胞稳定表达Cas9-Flag-Neo，经400ug/mlG418筛选得到的单克隆，经Western Blotting验证该克隆可以表达Cas9蛋白，可直接用Crispr技术编辑基因组DNA。 
培养条件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS；400ug/ml G418
传代方法  1:4~1:6传代；每周2~3次。
传代情况 C3
冻存条件  基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法（-）
STR  Amelogenin：x,y；CSF1PO：10,11；D12S391：18,21；D13S317：12,13；D16S539：11,11；D18S51：12,12；D19S433：13,13；D21S11：30,33,34；D2S1338：16,16；D3S1358：16,16；D5S818：10,13；D6S1043：11,11；D7S820：7,11；D8S1179：13,14；FGA：22,22；Penta E：12,14；TH01：7,7；TPOX：11,11；vWA：17,19；
同工酶 
染色体 
使用权限 A类
细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:    
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。   细胞到达客户手中，1个月内出现任何问题，导致细胞在冻存前死亡，我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤：
1）贴壁细胞传代：提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内，吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞，加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用，用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
2）悬浮细胞传代：将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min，弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。

噻孢霉素5g
DNA 电泳分子量标准 (3)λDNA/EcoR I50 次
RNA 洗脱液10mL
TH1 菌种1mL
130838-250Red-KOD DNA 聚合酶250U
70908-30DNA PAGE 胶回收试剂盒30 次
随机引物法 DNA 探针生物素标记试剂盒5次
单酶一管式 RT-PCR 试剂盒 (Tth)50 次
Western 印迹膜封膜液 (NC 膜和 PVDF 膜 ) 100mL
GAPDH 小鼠单抗30μL
130634-1000人源脱嘌呤 / 脱嘧啶 (AP) 核酸内切酶激酶1000U
130840-5MgSO4溶液，10mM，PCR 5mL
天净沙单细胞 RNA 扩增试剂盒80 次
EDTA 溶液，0.2M1mL
无 RNase 的 DNase 溶液 ,1U/μL300U2-Chloroanthraquinone2-蒽醌131-09-9
9-(4-Acetoxy-3-acetoxymethylbutyl)-2-amino-6-chloropurine9-(4-乙酰氧基-3-乙酰氧基丁基)-2-氨基-6-嘌呤97845-60-8
5-Aminouracil5-氨基尿嘧啶932-52-5
Nalpha-FMOC-L-AsparagineFmoc-L-天冬酰胺71989-16-7
Ammonium alcohol polyvinyl phosphate聚乙醇磷酸铵
4-Nitro-3-trifluoromethyl aniline4-基-3-三基胺393-11-3
2-Fluoro-5-sulfamoyl-benzoic acid2--5-磺酰胺基-酸112887-25-9
Polygalasaponin F瓜子金皂苷己882664-74-6
Orange IV橙黄Ⅳ554-73-4
NA葡萄糖铵
CI 45010派洛B2150-48-3
2-Nitrophenylhydrazine hydrochloride2-基肼酸56413-75-3
SHANZHISIDE METHYL ESTER三栀子甙酯64421-28-9
N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3-methoxyaniline sodium salt dihydrateN-乙基-N-（2-羟基-3-磺丙基）-3-氧基胺82692-96-4
Acetyl bromide乙酰溴506-96-7
n-Butyllithium正丁基锂109-72-8
Difenoconazole环唑119446-68-3
Alantolactone土木香内酯546-43-0
Disodium fumarate富马酸17013-01-3
Clorpyrifos毒死蜱2921-88-2
Zinc acetate醋酸锌557-34-6
DIOSMETIN香叶木素520-34-3
显影粉1袋
CAS7365-82-4N- 氨基甲酰甲基乙磺酸5g
131128F-100动物种属鉴定 PCR Mix 6100 次
XbaI1500U
钙调神经磷酸酶测试盒24 T
碘硝基四唑紫嘌呤250mg