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Cas9稳定表达的人乳腺癌细胞；MCF7-Cas9-543图片【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。
细胞名称 Cas9稳定表达的人乳腺癌细胞；MCF7-Cas9-543图片
形态特性  上皮样
生长特性 贴壁生长
特征特性  该细胞是采用慢病毒感染的方式使MCF7细胞稳定表达Cas9-Flag-Neo，经400ug/mlG418筛选得到的单克隆，经Western Blotting验证该克隆可以表达Cas9蛋白，可直接用Crispr技术编辑基因组DNA。 
培养条件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS；400ug/ml G418
传代方法  1:3~1:6传代；每周2~3次。
传代情况 C3
冻存条件  基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法（-）
STR  Amelogenin：x,x；CSF1PO：10,10；D12S391：18,20；D13S317：11,11；D16S539：11,12；D18S51：14,14；D19S433：13,14；D21S11：30,30；D2S1338：21,23；D3S1358：16,16；D5S818：11,12；D6S1043：12,18；D7S820：8,9；D8S1179：10,14；FGA：23,24,25；Penta E：7,12；TH01：6,6；TPOX：9,12；vWA：14,15
同工酶 
染色体 
使用权限 A类
细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:    
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。   细胞到达客户手中，1个月内出现任何问题，导致细胞在冻存前死亡，我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤：
1）贴壁细胞传代：提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内，吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞，加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用，用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
2）悬浮细胞传代：将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min，弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。

戊二醛二甲酸缓冲固定液250 mL
CAS9005-64-5吐温 -20100mL
19-0071-500F12K 液体培养基 ( 无血清和双抗 )500mL
120522-50柱式血液 DNA-RNAout50 次
琼脂糖100g
D(+) 木糖5g
大提柱式真菌 RNAout5次
一步式 RT-PCR Mix 1mL
131096-1生物素化的碱性磷酸酶 (AP)1mg
100931-100ROX 参考染料 II100μL
UTP 溶液，2.5mM2mL
非冻型尿液 DNA 保存液15mL
牛胰岛素25mg
碘化丙啶干粉10mg
CAS50-81-7抗坏血酸25g
130859A-10M13mp18DNA10μg
硝酸纤维素膜，13×20cm1张Bis-(triphenylphosphino)-cuprous borohydride双(三基膦)氢化亚铜16903-61-0
Nitroethane基乙烷79-24-3
DL-2-AMINOPROPIONIC ANHYDRIDE丙氨酸酐5625-46-7
1-PHENYL-3-CHLORO-1-PROPYNE1-基-3--1-3355-31-5
NAB27
DI-N-HEXYLAMINE二正己胺143-16-8
METHYL 2-BROMO-5-CHLOROBENZOATE2-溴-5-酸酯27007-53-0
2-Piperidineethanol2-啶乙醇1484-84-0
Methyl cyclopentylacetate环基乙酸酯2723-38-8
2-(ALLYLOXY)TETRAHYDROPYRAN2-丙氧基四氢吡喃4203-49-0
N-FormylmorpholineN-酰啉4394-85-8
NAD-壳聚糖
4'-Hydroxypropiophenone4-羟基丙70-70-2
N-METHYL-L-PROLINE MONOHYDRATE 98N-基-L-脯氨酸,一水199917-42-5
(R)-(+)-1-Phenylethanol(R)-(+)-1-基乙醇1517-69-7
DYSPROSIUM CHLORIDE化镝(III)10025-74-8
4-chloro-2-methylbenzenesulfonyl chloride4--2-基磺酰56157-92-7
2,4-Difluorobenzophenone2,4-二二85068-35-5
Cupferron铜铁试剂135-20-6
DIMETHYL 2,6-PYRIDINEDICARBOXYLATE2,6-吡啶二酸二酯5453-67-8
固相内毒素清除剂500g
聚乙二醇 3350250g
玻璃珠法柱式酵母 DNAout50 次
CAS620-45-12,6- 二氯酚靛酚1g